流式细胞术抗体预混吗？

hellzhu

各位大神你们好，我想进行T细胞亚群分群的流式细胞术，在抗体使用的环节有点疑问。具体如下：1.师兄带我实验，细胞固定、破膜（固定液破膜液预混）后直接添加了6种抗体（有表面抗体，有胞内抗体），这样子的实验步骤是否不妥（破膜后表面抗体也会进入胞内吗？会不会影响结果？）？2.抗体种类：CD3、CD4、INF-y、IL-17a、CD-25、Foxp3。我想区分Th1\Th2\Th17和Treg的，我查了一下资料，里面好像缺少了Th2的标志物，我的判断对吗？应该再加入哪个抗体呢？
感谢大神们耐心看完，期待回答。

Yuck

一般建议先表染再固定破膜做胞内或核内。但是有一些文献的确是说固定破膜后表染也能染上，不是说不能染，只是程度强度有不同。建议改为正常流程操作。建议直接买套因子试剂盒吧，都通过因子来区分。

hellzhu

Yuck 发表于 2024-8-8 08:26
一般建议先表染再固定破膜做胞内或核内。但是有一些文献的确是说固定破膜后表染也能染上，不是说不能染，只 ...

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三更灯火

分开预混，表染完，再破膜染或破核染，记得Fc 和调好补偿，效果还可以的。

tangxun

先表面染色，洗掉，固定破膜，染胞内抗体，洗掉，上机。Th2标志物不清楚，IL-17a的刺激培养我一直没能做的很成功，不知道你们做的怎么样。

hellzhu

tangxun 发表于 2024-8-9 16:30
先表面染色，洗掉，固定破膜，染胞内抗体，洗掉，上机。Th2标志物不清楚，IL-17a的刺激培养我一直没能做的 ...

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hellzhu

三更灯火 发表于 2024-8-9 11:20
分开预混，表染完，再破膜染或破核染，记得Fc 和调好补偿，效果还可以的。 ...

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Fish形影单只

Th2用IL-4。
Th1\Th2\Th17需要刺激，最好是先用淋巴细胞分离液分离，然后去刺激。我做过对比，全血刺激效果没有分离的效果好。
Treg单独做，破膜剂买BD的562574，我一直用这个，效果挺好的。

hellzhu

Fish形影单只 发表于 2024-8-12 14:19
Th2用IL-4。
Th1\Th2\Th17需要刺激，最好是先用淋巴细胞分离液分离，然后去刺激。我做过对比，全血刺激效果 ...

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