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[淋巴细胞相关] 又是我!还是T细胞

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发表于 2024-8-12 15:04:48 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
最近开始做T细胞相关的实验。请各位有经验的大拿指点一二:
1、关于T细胞转染的问题,请问大家都用什么方式来转染的呢?我用的电转,细胞死的很多,实验做起来很吃力。(文献有用电转,有用lipo3000转,我师兄带我做的是电转)
2、我想往T细胞里面转点mimics观察T细胞亚群分群的影响的。查了一些文献,里面是这样写的 “To evaluate the functionality of the miRNAs upregulated in MS-exosome, CD3 + T cells from healthy donors were transfected with let-7i, miR-19b, miR-25 or miR-92a, and cultured with anti-CD3 and anti-CD28 mAbs for 72h.”没看懂里面写的是先刺激在转染,还是转染的同时加刺激物呢?请问各位大拿是怎么做的?
3、我的预实验:T细胞分选,电转,加刺激剂培养72小时,上流式。inhibited、NC、inNC都比较正常,mimics组的电压好奇怪,会是什么问题的呢?求各位大拿解答。
感谢!阅贴愉快!

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发表于 2024-8-12 16:23:24 | 显示全部楼层
电转是很容易死的,现在的CAR-T制备工艺为什么不用电转,就是这个原因

至于文献里面的,需要找原文及其附件好好研究的,看这句话的意思似乎是转染后再刺激

最后上机图形怪,应该还是跟细胞死亡有关
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 楼主| 发表于 2024-8-13 23:06:55 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2024-8-12 16:23
电转是很容易死的,现在的CAR-T制备工艺为什么不用电转,就是这个原因

至于文献里面的,需要找原文及其附 ...

倪老师,BD的一个白介素4的抗体554435,查了一下资料,显示是免 疫 原:  Partially Purified Mouse IL-4,有没有可能染的上人的IL-4的呢??
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发表于 2024-8-14 07:45:55 | 显示全部楼层
hellzhu 发表于 2024-8-13 23:06
倪老师,BD的一个白介素4的抗体554435,查了一下资料,显示是免 疫 原:  Partially Purified Mouse I ...

这个是大鼠抗小鼠的,通常不建议,因为不太清楚是否和人IL-4有交叉反应
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 楼主| 发表于 2024-8-14 08:41:34 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2024-8-14 07:45
这个是大鼠抗小鼠的,通常不建议,因为不太清楚是否和人IL-4有交叉反应

明白,谢谢倪老师
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