脾脏巨噬细胞检测

养老院VIP少女

各位老师同学们，关于流式检测巨噬细胞有个问题请教，感谢大家！！

问题：
看一些帖子说脾脏巨噬细胞是CD11b-/low F4/80+，文献中荷瘤后小鼠脾脏的巨噬（TAM）是CD11b+F4/80+，我自己做了脾脏流式检测巨噬，WT和荷瘤鼠的CD11bF4/80图差异还是挺大的。如果我想分析荷瘤鼠与不荷瘤鼠，脾脏巨噬细胞某蛋白的MFI，我分析哪群细胞呢？

流式图：
抗体Zombie-BV510, CD45-APCCY7, CD11b-FITC, F4/80-APC, CD3-PERCRCY5.5, Ly6C-PE, Ly6G-BV21。
分析流程主要细胞群-去粘连-活细胞-CD45+-巨噬

niwanmao

不知道上级门是按照什么设的，这个图形分布不像是排除了其它细胞的样子
但目前这个门应该是可以的

养老院VIP少女

niwanmao 发表于 2024-8-22 21:13
不知道上级门是按照什么设的，这个图形分布不像是排除了其它细胞的样子
但目前这个门应该是可以的 ...

老师，这个的上级门是CD45+，CD45+门之前是去粘连-活细胞。我想分析荷瘤前后，脾脏巨噬细胞某一蛋白的MFI变化，是分析CD11B+F4/80+吗？因为我看帖子说正常小鼠脾脏巨噬是CD11B-/low F4/80+,所以有点困惑

niwanmao

养老院VIP少女 发表于 2024-8-25 10:38
老师，这个的上级门是CD45+，CD45+门之前是去粘连-活细胞。我想分析荷瘤前后，脾脏巨噬细胞某一蛋白的MFI ...

11b的low，通常比这个强度还是要高一点的，介于阳和阴之间的位置，像这个还是太弱了点

通常设门，是会先通过LIN组合抗体，把其它系列细胞排除掉，再圈

养老院VIP少女

niwanmao 发表于 2024-8-25 13:49
11b的low，通常比这个强度还是要高一点的，介于阳和阴之间的位置，像这个还是太弱了点

通常设门，是会先 ...

好的老师，我下次做的时候用LIN去除下。还有个问题想请教老师，我用流式A抗体，将某一细胞（会有多个处理组）分为A+和A-两群，之后分析A+和A-上B的MFI，A我是用isotype 圈门，B我打算用FMO（B-FMO）做对照。B-FMO里的A应该用抗体A而不是isotype吧？分析A+和A-上B的MFI分别减去B-FMO中对应的A+和A- 上B的MFI？如果我不做B-FMO，直接比较A+和A-上B的MFI可以吗？感谢老师！！！

niwanmao

养老院VIP少女 发表于 2024-8-27 11:42
好的老师，我下次做的时候用LIN去除下。还有个问题想请教老师，我用流式A抗体，将某一细胞（会有多个处理 ...

B-FMO内只加A，不加B

MFI通常不建议减，相减是ELISA时代的思路，流式上可以对比表达率统计学差异，也可以比对MFI统计学差异，但不建议减

养老院VIP少女

niwanmao 发表于 2024-8-27 11:52
B-FMO内只加A，不加B

MFI通常不建议减，相减是ELISA时代的思路，流式上可以对比表达率统计学差异，也可 ...

感谢老师，您的意思是B-FMO是为了gate B+，统计B的MFI可以直接比较，不用参考B-FMO了是吧？

niwanmao

养老院VIP少女 发表于 2024-8-27 14:00
感谢老师，您的意思是B-FMO是为了gate B+，统计B的MFI可以直接比较，不用参考B-FMO了是吧？ ...

B的MFI，是不用FMO的，直接对比

要分析B的比例，需要FMO

养老院VIP少女

niwanmao 发表于 2024-8-27 16:43
B的MFI，是不用FMO的，直接对比

要分析B的比例，需要FMO

明白了，感谢老师！