请教流式圈门是否正确

ny1164

BV421单染

FMO-B+P+A+F-，BV421=死活，FITC=CD45，

样本1, BV421=死活，FITC=CD45，圈BV421-FITC-

样本2, BV421=死活，FITC=CD45，圈BV421-FITC-

这是个4染的实验，用了BV421，FITC，PE-cy7和APC，其中BV421=死活，FITC=CD45。
上面的图从上到下依次是：1）BV421的单染；
                                      2）FMO_B+P+A+F-；
                                      3）样本1（细胞比较多），想圈BV421-FITC-；
                                      4）样本2（细胞比较多），想圈BV421-FITC-。

我的问题是，从单染和FMO看BV421的阴性似乎快到10^3了，但是样本里面BV421分群很明显；同样的在FMO里，虽然FITC没染，但是FITC也能看出分了两群，那么在样本1和2里，我想圈出BV421-FITC-的细胞，对于BV421来说，只圈下面的细胞是否合适（左下角小框）？对于FITC来说，是应该只圈左下角那一部分细胞（左下角小框）还是把右边的都圈上（图下方大框）？还是有别的圈法？谢谢各位老师！

niwanmao

ny1164 发表于 2024-8-27 21:07
谢谢倪老师。我这个样本是大鼠的主动脉，样本1和2的图里想圈BV421-FITC-的细胞是想圈活的CD45-的细胞，BV ...

主动脉通常CD45-，那么应该是圈左下方

niwanmao

问题我其实没看懂，因为不知道你用什么样本，需要用具体什么标记圈什么细胞，但是你现在这个圈法应该是问题不大的

ny1164

niwanmao 发表于 2024-8-27 16:53
问题我其实没看懂，因为不知道你用什么样本，需要用具体什么标记圈什么细胞，但是你现在这个圈法应该是问题 ...

谢谢倪老师。我这个样本是大鼠的主动脉，样本1和2的图里想圈BV421-FITC-的细胞是想圈活的CD45-的细胞，BV421是死活染料，FITC标的CD45。我是不知道我在样本里圈活的CD45-细胞的时候，是应该只圈左下角那一群的细胞（短的不规则框），还是把整个下部的细胞都圈上（长的不规则框）

ny1164

niwanmao 发表于 2024-8-27 21:22
主动脉通常CD45-，那么应该是圈左下方

好的，谢谢倪老师！