M2巨噬细胞极化

yuqing_X

将THP-1细胞先诱导成M0，再加IL4和IL13诱导分化为M2。再使用BD CD206抗体染色（APC通道检测）BD CD86抗体染色（PE通道检测），上流式检测CD206，CD86表达情况。
问题是：无论固定破膜与否，CD206的MFI都很低，只有几百甚至几十，这是正常的吗？

yuqing_X

家人们怎么看，大家有看法可以表达一下嘛（帮帮孩子qaq)，这个问题困扰了一个月了，目前怀疑抗体有问题，但是BD技术坚持抗体没问题。。。

麦小光

换一个指标吧，借点CD163的抗体，如果同一组细胞CD163能染上，CD206不行，那有可能是抗体问题，如果CD163也不行，那大概率是实验的问题

niwanmao

yuqing_X 发表于 2024-9-6 11:25
家人们怎么看，大家有看法可以表达一下嘛（帮帮孩子qaq)，这个问题困扰了一个月了，目前怀疑抗体有问题，但 ...

CD206我们平时在人的组织样本中还能分出的
细胞株诱导后，你是否能够有证据确认其真的向M2分化了？例如胞内IL-10、iNOS，如果这些证据有表达，而CD206没有，你就可以肯定的跟BD那边说是CD206抗体问题；如果这两个胞内指标都没有，那么说明没有往M2分化，CD206不表达也就理所应当了

danieladaniela

首先，THP-1诱导分化为巨噬细胞这个实验真的是很难做，THP-1是本实验最大的变量，以本人经验
1. M1诱导是比较稳定的，CD86表达85%以上，CD86的极化程度和LPS浓度相关
2. M2比较难诱导，比例10%左右，文献报道，降低PMA的浓度、M0后静息，有利于M2方向诱导
3. 细胞因子严格分装，勿反复冻融，以减少实验的干扰项
4. 实在不行，及时更换新的THP-1（1个月-1.5个月新复苏）

yuqing_X

麦小光 发表于 2024-9-8 10:13
换一个指标吧，借点CD163的抗体，如果同一组细胞CD163能染上，CD206不行，那有可能是抗体问题，如果CD163也 ...

好！感谢大佬！我去试试

yuqing_X

niwanmao 发表于 2024-9-8 11:44
CD206我们平时在人的组织样本中还能分出的
细胞株诱导后，你是否能够有证据确认其真的向M2分化了？例如胞 ...

老师，我确认已经向M2分化了，从thp——M0——M2，细胞形态变化非常明显，M2是梭形长条状，伸出来伪足，镜下观察可以确认。我去试一试能不能测iNOS！谢谢老师！

yuqing_X

danieladaniela 发表于 2024-9-9 15:00
首先，THP-1诱导分化为巨噬细胞这个实验真的是很难做，THP-1是本实验最大的变量，以本人经验
1. M1诱导是比 ...

是真的太难做了，做了五个月还没做出来结果（大哭），谢谢大佬的经验，学习了，后面会注意这些问题！