488和561激光器激发PE抗体的阳性百分比会差异很大吗？

wmj123456

请教各位老师，细胞系表达某个抗原，抗原蛋白偶联的是PE抗体，抗原表达应该不是很强的，同一份样本分别在2台仪器，分别被488和561激发的，488激发的百分比偏低，比561激发的低10-20%，请问是激光器不同导致的吗

niwanmao

激光器波长差异是导致检测结果不同的主要原因。561nm 激光更接近 PE 的最佳激发波长，因此能够更有效地激发 PE 荧光素，产生更强的信号。

抗原表达水平弱会放大这种差异，因为弱信号更容易受到激发效率的影响。

对于强表达的抗原，不同波长激光的激发效率差异仍可能导致检测结果有所不同，但差异可能会很小。这是因为强信号可以更容易地区分阳性和阴性群体，减小了阈值设置的影响。

wmj123456

niwanmao 发表于 2024-9-14 22:43
激光器波长差异是导致检测结果不同的主要原因。561nm 激光更接近 PE 的最佳激发波长，因此能够更有效地激发 ...

倪老师，谢谢您的及时解答。关于488和561激发强信号的问题，之前有测试过cd3-pe，阴阳性分群明显，在2台仪器上的百分比几乎没有什么差异的。不过用561的时候，FITC对PE的溢漏几乎没有。

niwanmao

wmj123456 发表于 2024-9-15 08:27
倪老师，谢谢您的及时解答。关于488和561激发强信号的问题，之前有测试过cd3-pe，阴阳性分群明显，在2台仪 ...

是的，使用561nm激光时，FITC（最大激发波长约494nm）几乎不被激发，因此FITC对PE通道的溢漏几乎就没有了

只是配备561nm激光器的仪器蛮少的，可能科研仪器比较多一点，临床仪器基本上都没看到