Biolegend的流式抗体用量都是0.25ug/100ul体系吗

hydwl2019

Biolegend也没有技术的电话，我看所有都写0.25ug，BD的抗体有的会写每Test多少ul

niwanmao

1. 0.25ug/100ul，跟BD的20ul/100ul，是类似的用量指导，只是一个用质量一个用体积而已，这不是问题的。你可以根据0.25ug占该支抗体总质量的比值，算出体积用量
2. 通常来说，最好自己做一下滴定，会更好

wxd

不是的。我们经常用的biolegend公司的CD45、CD19，说明书建议用量都是5 μL/test（换算过来分别是2.5 μg/test和0.25 μg/test）。但是根据滴定结果，在实际样品检测过程中，这两个抗体的用量分别是0.25 μg/test和0.05 μg/test。

hydwl2019

wxd 发表于 2024-9-21 08:38
不是的。我们经常用的biolegend公司的CD45、CD19，说明书建议用量都是5 μL/test（换算过来分别是2.5 μg/t ...

我也买了biolegend的CD45，是APC通道的，咱来一样吗

麦小光

这些都只是一个建议用量，保证你不会翻车的用量，但是有条件的情况下，还是建议做滴定，摸到合适的条件用量，这样，做实验效率高，也省抗体。通常情况下，我个人感觉，biolegend的抗体在能染出的情况下，适当稀释个3-5倍，不影响结果。但是这都是建立在体系成熟，实验稳定的情况下，尽量不要一上来就稀释或者改浓度，一切以实际效果为准，抗体滴定的方法之前倪老师分享过，可以搜索一下。

麦小光

并且抗体与抗体之间最大的差异不是蛋白浓度，而是效价差异，有些抗体按照标准浓度也就将将够，刚好分群。有些效价高的抗体，稀释过两百倍还能有效分群（我就遇到过），所以更应该关注抗体的效价，而不是浓度。再说了，流式抗体还有偶联的荧光素，那个也很影响最终的结果，具体荧光素的强弱和选择策略，之前倪老师也分享过，可以检索学习下。

hydwl2019

麦小光 发表于 2024-9-21 16:49
并且抗体与抗体之间最大的差异不是蛋白浓度，而是效价差异，有些抗体按照标准浓度也就将将够，刚好分群。有 ...

感谢分享，想请教一下，做滴定的时候是各种不同类型的细胞都要做一次滴定吗还是只用一种细胞就行，我后面要做外周血，脾脏，淋巴结，结肠的免疫细胞的流式，还有DC2.4这种的细胞系

niwanmao

hydwl2019 发表于 2024-9-21 20:03
感谢分享，想请教一下，做滴定的时候是各种不同类型的细胞都要做一次滴定吗还是只用一种细胞就行，我后面 ...

因为是为了确定抗体最佳用量，所以可以只用一种细胞，但要确保里面同时有阴性细胞和分群很好的阳性细胞，这是最理想的

找到最佳用量之后，每种细胞染色时，要确保细胞数量、染色总体积都尽量一致

麦小光

还有一个，biolegend直接买确实没有技术服务，但是你去达科为买，他们的技术服务还可以，至少对于入门用户来说很友好，他们base上海，其他城市的业务不清楚，基本上只要你是客户，他们都会做服务

hydwl2019

麦小光 发表于 2024-9-23 22:24
还有一个，biolegend直接买确实没有技术服务，但是你去达科为买，他们的技术服务还可以，至少对于入门用户 ...

感谢，我是从实际商那买，不知道他们是不是达科为进货