周期和MTT结果对应不上

Fish形影单只

各位老师，我发现有时候MTT的结果显示细胞增值被抑制了，但是周期的结果S期和G2期比例却明显增高。

这种结果可以考虑是因为药物作用使得细胞分裂被终止在S期和G2期末尾吗？
如果是这个原因，有什么检测方法证实吗？

niwanmao

猜测可能两种可能性：
1、MTT实验主要测量线粒体脱氢酶的活性，间接反映细胞的代谢活性和数量，所以跟抑制DNA合成不一定同步。
2、部分细胞可能受到抑制或死亡，导致MTT结果显示总体增殖下降。剩余细胞可能出现代偿性增殖，表现为S期和G2期比例增加。

后续的建议：
1、进行时间序列实验，观察不同时间点的MTT和细胞周期结果。
2、使用其他细胞增殖实验方法（如@hongrui 站友推荐的EdU掺入实验）来验证结果。
3、检测细胞周期调控蛋白（如p21、cyclin D、cyclin E等）的表达变化。
4、进行细胞凋亡检测，排除凋亡对结果的影响。
5、考虑使用实时细胞分析系统（如xCELLigence等）来动态监测细胞生长。

hongrui

你可以试试用edu检测来证实，edu实验完成后上流式，Hoechst 33342可以代替PI去查看周期，然后看看S期和G2期细胞中的edu荧光强度。

Fish形影单只

niwanmao 发表于 2024-10-22 09:17
猜测可能两种可能性：
1、MTT实验主要测量线粒体脱氢酶的活性，间接反映细胞的代谢活性和数量，所以跟抑制D ...

感谢倪老师的解答。

Fish形影单只

hongrui 发表于 2024-10-22 10:52
你可以试试用edu检测来证实，edu实验完成后上流式，Hoechst 33342可以代替PI去查看周期，然后看看S期和G2期 ...

明白了，谢谢老师的帮助。