[求助]造血干细多色流式检测（配色方案）

将求索

各位同仁，


大家好！我是生物医学专业的一名博士生，我目前流式配色上遇到一些困难，希望寻求大家的帮助。

我的实验目的是：检测小鼠造血干细胞中的线粒体膜电位。方法是：分离小鼠骨髓细胞，对表面marker进行染色(包括：c-kit, sca1, cd48, cd150)，随后使用线粒体膜电位探针TMRE进行染色。因为项目的原因，我还需要使用Hoechst染核。所以我一共需要检测6个颜色。

我现在有两个方案，
方案1：Alexa A700, APC, FITC, Percp-cy5.5, TMRE, Hoechst.
方案2：Alexa A700, PE/Cy7, FITC, Percp-cy5.5, TMRE, Hoechst.

两个方案的不同在于APC和PE/Cy7的选用，不知道哪种方案更加可行？我使用的是BD Aria Fusion（4激光）。两种配色方案的Spectrum Viewer如下。

后续我将更新我的实验结果，欢迎大家参与讨论！

niwanmao

Spectrum Viewer已经做的相当不错了

仅从光谱看，这两个方案都会有较大的荧光渗漏的顾虑在，APC方案涉及到APC和A700的荧光渗漏，PE-cy7方案涉及的的主要PE-cy7和PerCP-cy5.5

但由于你这里黄激光以及相关通道可以使用，所以我倒觉得可以优先选择PE-cy7方案，黄激光对应通道检测PE-cy7信号和MitoStatus TMRE，蓝激光检测FITC和PerCP-cy5.5，红激光检测AF700

将求索

@niwanmao 希望版主可以提出意见，谢谢！