SYBR-Green检测细菌有2个问题想与大家探讨

wmj123456

1用SYBR-Green和ssc显示时，有些菌的SYBR-Green阴阳性分群不是明显的2群，中间有弱阳性群体，这个弱阳性的也需要圈到菌的门里吗？这个弱阳群体是PI阴性的，它们是活菌但是状态不是很好的菌？或者是细菌碎片或游离的DNA？


2有些菌样本从SYBR-Green圈门后，再看PI和ssc，也不会呈现明显的阴阳性2群，有的甚至是连续性表达，很难界定活菌和死菌的群体。有做过不加PI只加SYBR-Green的设门对照，但是感觉不合适，针对这种情况，大家有好的设门建议吗？

niwanmao

1、可能是你理解的"VBNC"(可培养但非培养态)
2、分群不清的时候，就比较难了，是否可用三种已知状态的对照样本确认其边界？
- 未处理活菌对照
- 70%乙醇处理的死亡对照
- 56℃热处理15min的中间状态对照

wmj123456

niwanmao 发表于 2025-2-15 21:36
1、可能是你理解的"VBNC"(可培养但非培养态)
2、分群不清的时候，就比较难了，是否可用三种已知状态的对照 ...

1这种情况，弱阳的需要圈进来作为菌的群体吗？还是根据实验情况来判断？
2这三种情况都是单独加PI染料？乙醇和56度热处理可以呈现不同的状态吗？乙醇处理全部是死菌，热处理有部分死菌？

niwanmao

wmj123456 发表于 2025-2-15 21:41
1这种情况，弱阳的需要圈进来作为菌的群体吗？还是根据实验情况来判断？
2这三种情况都是单独加PI染料？ ...

是否要圈VBNC，还是需要看你的实验目的

三种对照都是单独加PI