本帖最后由 面团胖宝宝 于 2025-4-12 03:15 编辑
细胞来源为人PBMC，美天旎的kit阴性分选出Naïve CD4+T cells后用biolegend的CD3/28磁珠激活，加入20ng/ml IL-4，20ng/ml IL-2, 10ug/ml anti-IFN-gama培养7天后流式检测。
检测流式当天用eBioscience的cellstimulation cocktail激活，同时加入BD的Golgplug和Golgstop,用量均与官网推荐用量一致，5小时后固定破膜上机检测
流式制样先染死活染料Zombie Violet，再封闭FcγR，随后用eBioscience的FOXP3 Fixation/Permeabilization固定破膜（室温，30min）（这一步不知道是不是问题所在？因为我们实验室测胞内因子都用的这个kit，没有另外买专门染胞内因子的kit，但是我测其他细胞的胞内因子用这个FOXP3的kit也没有问题）
然后染CD4，IL-4，IL-5，IL-13, gata3 (室温，1h，不知道这里需要更改为4度过夜孵育？)，最后上机。
以下结果是FMO对照和实验染色组。IL-4和IL-13基本测不到，IL-5能测到一些但是没有分群。Gata3的检测没有问题。qPCR’和ELISA均能检测到IL-4,5,13，所以考虑是流式染色的问题而不是Th2细胞本身的问题。
求老师解答！
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