用流式细胞仪测细菌阈值根据什么确定

大美大美

我想问下，用荧光探针标记乳杆菌大小2um左右，用荧光标记后。上机，用空白管确定参数，设置一个散点图FSC-SSC,B525-SSC，直方图B525-count

1.是B525-count直方图样品管向右移动了就是被标记上了吗
2.阈值怎么确定设置为多少呀

niwanmao

B525是你这个荧光探针的通道的话，阳性就提示有

FSC和SSC的阈值可用相似大小的微球确定，荧光大多数不会设置阈值

这么小的细菌，对于液流和上机缓冲液要求很高

大美大美

niwanmao 发表于 2025-5-26 16:14
B525是你这个荧光探针的通道的话，阳性就提示有

FSC和SSC的阈值可用相似大小的微球确定，荧光大多数不会设 ...

老师，我请问一下，阈值一般设置多大合适呀，大于10000吗

niwanmao

大美大美 发表于 2025-5-26 16:38
老师，我请问一下，阈值一般设置多大合适呀，大于10000吗

每台机器的阈值范围是不同的，需要你根据已知数据去估计和预调

hannotech

可以找一个没有染色的、粒径大小相近的微球来确定阈值。比如用spherotech的#BCP-20-5

司徒随风

按我们做血小板的经验阈值是10000，我们是贝克曼的仪器，你可以先低速跑起来，跑带荧光的样本，然后根据荧光颗粒反向设置阈值，然后应用到其他样本。

wmj123456

我使用的仪器在做菌的时候，在FSC和SSC图中，选择对数模式，先把阈值改为仪器的最小值，有些菌的主群和杂质背景是可以明显区分的，如果不清晰，用FITC阳性群体反圈确认，再根据菌群体看阈值是否合适。其他的仪器不太清楚，供参考