体外分化DC的圈门及定义问题

哈姆雷特的救赎

各位老师，我现在用的是log分析仪器，跑出来的图与正常线性的不同，我现在做猪的体外分化的MODC以及BMDC，以下是我的淋巴细胞圈门、DC圈门图。

我想问一下：
1、是否可以按照以下方式圈门（可能会圈到单核和巨噬细胞），然后用CD14-CD163-去除单核及巨噬（体外分化的DC是否还带有这两个标志物呢），用CD11C+MHC II+去圈出DC？
2、体外分化DC是否需要染死活？
3、如果全圈单核、巨噬、淋巴细胞及DC、按照原理来说，去粘连时所有细胞是否应该都呈45度在一条线上？
希望有老师能帮忙一一解答，万分感谢！！

niwanmao

通常，前向和侧向用Log分析是为了分析红细胞和血小板这些小的信号，我不知道你为什么坚持要用Log坐标

设门方案，其实有文献可以参考：Ondrackova P, Matiasovic J, Volf J, Dominguez J, Faldyna M. Phenotypic characterisation of the monocyte subpopulations in healthy adult pigs and Salmonella-infected piglets by seven-colour flow cytometry. Res Vet Sci. 2013;94(2):240-245. doi:10.1016/j.rvsc.2012.09.006

哈姆雷特的救赎

niwanmao 发表于 2025-6-8 15:19
通常，前向和侧向用Log分析是为了分析红细胞和血小板这些小的信号，我不知道你为什么坚持要用Log坐标

设门 ...

倪老师，因为这仪器跑出来就是log，我试着改成线性，跟正常线性跑出来的结果还是不一样，还不如用log圈的准

哈姆雷特的救赎

niwanmao 发表于 2025-6-8 15:19
通常，前向和侧向用Log分析是为了分析红细胞和血小板这些小的信号，我不知道你为什么坚持要用Log坐标

设门 ...

倪老师，我上传了调成线性的样子，麻烦您帮忙指导一下，哪一种比较好一点

niwanmao

哈姆雷特的救赎 发表于 2025-6-9 10:23
倪老师，我上传了调成线性的样子，麻烦您帮忙指导一下，哪一种比较好一点 ...

死活有没有染？
另外其它标记分群如何？

我感觉不是这个仪器线性不好，而很可能是你的细胞活性不好

哈姆雷特的救赎

niwanmao 发表于 2025-6-9 10:42
死活有没有染？
另外其它标记分群如何？

倪老师，没有染死活。正常标志物分群都还可以，比较正常。

哈姆雷特的救赎

niwanmao 发表于 2025-6-9 10:42
死活有没有染？
另外其它标记分群如何？

图中右上角有一群竖直的细胞，您知道是什么吗

niwanmao

哈姆雷特的救赎 发表于 2025-6-9 19:56
倪老师，没有染死活。正常标志物分群都还可以，比较正常。

我个人建议还是先染一下死活吧，这个特关键

如果你认为正常标志物分群都好，可以通过正常标记反设门，看看对应的细胞分布在哪个区域？如果在右上角贴边的区域有特异性细胞信号，则说明可能电压过大，如果没有就好

哈姆雷特的救赎

niwanmao 发表于 2025-6-10 08:20
我个人建议还是先染一下死活吧，这个特关键

如果你认为正常标志物分群都好，可以通过正常标记反设门，看 ...

明白了 谢谢倪老师