OMIP-110：37色光谱流式方案评估人体肠道淋巴细胞的转录因子和趋化因子受体

niwanmao

肠道免疫系统是人体最大的免疫器官，负责平衡对病原体的保护性免疫和对食物抗原及共生菌的耐受。当这种平衡被破坏时，会导致慢性炎症性疾病，如乳糜泻和炎症性肠病（IBD）。T细胞介导的炎症机制：

• Th1/Th17细胞分泌的促炎细胞因子增加
• 自身耐受丧失
• 调节性T细胞（Treg）功能异常
• 这些机制会导致小肠绒毛萎缩（乳糜泻）和结肠黏膜溃疡（溃疡性结肠炎）。
  

研究需求：由于人类组织样本有限，深入表型分析常规和非常规淋巴细胞亚群（患者和健康对照）面临挑战。光谱流式细胞术的发展极大提高了免疫细胞群体的高通量表型分析能力，通过分析每种荧光染料的全谱，提高了相似发射光谱染料（如PE和RealYellow 586）的分辨率。OMIP-110是一个37色光谱流式细胞术方案，用于评估人肠道组织中固有和适应性免疫淋巴亚群的表型分化，特别是CD4+ T辅助细胞亚群，结合转录因子和趋化因子受体。

方案概述

目的	评估人肠道黏膜中与炎症相关的淋巴细胞表型
物种	人类
细胞类型	肠道细胞、外周血、扁桃体
交叉引用	OMIP-021, OMIP-030, OMIP-060, OMIP-064, OMIP-067, OMIP-069, OMIP-071, OMIP-080, OMIP-082, OMIP-084, OMIP-090, OMIP-091, OMIP-094, OMIP-096, OMIP-099

方案组成

特异性	荧光染料	克隆号	用途
Viability（活性）	LIVE/DEAD Fixable Blue	-	活性检测
CD45	NovaFluor Blue 610-30s	2D1	白细胞
CD3	BV510	UCHT1	T细胞
CD7	BUV805	M-T701	T细胞
CD4	Alexa Fluor 532	RPA-T4	CD4+ T细胞
CD8α	Spark Blue 550	SK1	CD8+ T细胞
CD8β	BUV496	2ST8.5H7	CD8+ T细胞
CD56	Super Bright 436	TULY56	NK/NKT样细胞
CD19	Real Yellow 586	HIB19	B细胞
TCR γδ	VioBlue	11F2	γδ T细胞
Vα7.2	BV785	3C10	MAIT细胞
CD25	BV421	BC96	细胞因子受体
CD127	BV711	A019D5	细胞因子受体
CD45RA	PerCP	HI100	T细胞分化
CD45RO	BV570	UCHL1	T细胞分化
CD69	BUV737	FN50	组织驻留
CD103	PE/Fire 700	Ber-ACTB	组织驻留
CD152/CTLA-4	BV605	BNI3	调节
CD27	FITC	M-T271	激活
CD38	APC/Fire 810	HIT2	激活
CD39	BV650	TU66	激活
CD161	BUV563	HP-3G10	激活
HLA-DR	BV480	G46-6	激活
Granzyme B	PE/Dazzle 594	QA16A02	细胞毒性
Ki-67	BUV395	B56	增殖
CD183/CXCR3	APC/Fire 750	G025H7	趋化因子受体
CD185/CXCR5	BV750	J252D4	趋化因子受体
CD194/CCR4	BUV615	1G1	趋化因子受体
CD196/CCR6	BB700	11A9	趋化因子受体
CD197/CCR7	Spark NIR 685	G043H7	趋化因子受体
Bcl-6	R718	K112-91	转录因子
FoxP3	APC	PCH101	转录因子
GATA-3	PE/Cy5	TWAJ	转录因子
Helios	PerCP-eFluor 710	22F6	转录因子
T-bet	PE/Cy7	4B10	转录因子
PU.1	AF647	7C6B05	转录因子
RORγt	PE	Q21-559	转录因子

设门逻辑

• 通过CD45、CD3、CD19等标记物区分B细胞、T细胞、固有淋巴细胞（ILC）、NK细胞、MAIT细胞、γδ T细胞等。
• 使用CD27、CD38、CXCR5、PU.1、Bcl6、Ki-67等标记物进一步分析B细胞亚群（如初始B细胞、活化B细胞、生发中心B细胞、浆细胞、记忆B细胞）。
• 通过CD7、HLA-DR、CD56、CD127区分固有淋巴细胞（ILC）和NK细胞。
• 通过TCR Vα7.2、CD8α、CD8β、CD4区分T细胞亚群（如γδ T细胞、MAIT细胞、CD8αα+ T细胞、CD8αβ+ T细胞、CD4+ T细胞）。
• 使用Helios、FoxP3区分调节性T细胞（Treg）和常规CD4+ T细胞。
• 通过CD45RA、CD45RO、CCR7评估T细胞分化状态（如初始T细胞、中央记忆T细胞、效应记忆T细胞）。
• 使用Granzyme B、T-bet评估CD8+ T细胞的细胞毒性。
• 通过CD69、CD103评估组织驻留T细胞（TRM）。
• 使用CXCR3、CCR4、CCR6、CXCR5区分CD4+ T辅助细胞亚群（如Th1、Th2、Th17、Tfh）。
  

关键实验结果
1、B细胞亚群

• PBMC：主要亚群为初始B细胞（CD27−CD38−, #4）、活化B细胞（CD27−CD38+, #5）、记忆B细胞（CD27+CD38−, #8）。
• 肠道样本：
  
  • 除了上述亚群外，生发中心B细胞（CD27+CD38++, #6）和浆细胞（CD27++CD38++, #7）也非常丰富。
  • Ki-67在部分循环和肠道B细胞亚群中表达，Bcl6仅在肠道活化和生发中心B细胞中表达。
    
  
  
  
  

2、固有淋巴细胞

• 通过CD7、HLA-DR将CD3−CD19−细胞分为：
  
  • CD7−HLA-DR+（#9）：高SSC，可能为髓系细胞。
  • CD7+细胞：
    
    • CD56+CD127−（#11）：NK细胞。
    • CD56−CD127−（#12）：ILC。
    • CD127+（#13）：ILC。
      
    
  
  

3、 T细胞亚群

• 通过TCR Vα7.2、CD8α、CD8β、CD4区分：
  
  • γδ T细胞（#14）
  • MAIT细胞（#15）
  • NKT样细胞（#16）
  • CD8αα+ T细胞（#17）
  • CD8αβ+ T细胞（#18）
  • 双阴性T细胞（DN, #19）
  • CD4+ T细胞（#22）
    
• 调节性T细胞（Treg）：
  
  • 通过Helios、FoxP3区分：
    
    • Helios+FoxP3+ Treg（#20）
    • Helios−FoxP3+ Treg（#21）
    • 常规CD4+ T细胞（#22）
      
      
    
    
  
  

4、MAIT细胞

• 通过Vα7.2确定，并通过RORγt、CD161、GATA-3、CCR6进一步亚分群。
  
  

5、T细胞分化状态

• 通过CD45RA、CD45RO、CCR7区分：
  
  • 初始T细胞（TNAIVE, RA+RO−CCR7+, #24 & #30）
  • 中央记忆T细胞（TCM, RA−RO+CCR7+, #28 & #34）
  • 效应记忆T细胞（TEM, RA−RO+CCR7−, #27 & #33）
  • 终末分化效应记忆T细胞（TEMRA, RA+RO−CCR7−, #23 & #29）
    
    
  
  

6、细胞毒T细胞

• CD8αβ+ T细胞：
  
  • Granzyme B、T-bet在TEM（#27）和TEMRA（#23）中共表达。
    
    
  
  

7、组织驻留

• CD69、CD103在肠道T细胞中高表达，而在循环T细胞中表达较低。
  
  

8、CD4+ T辅助细胞亚群

• 通过CXCR3、CCR4、CCR6、CXCR5区分TEM亚群：
  
  • Tfh（CXCR5+, #35）
  • Th17（CXCR3−CCR6+, #36-39）
  • Th1（CXCR3+CCR6−, #40）
  • Th2（CXCR3−CCR6−CCR4+, #43）
    
• 转录因子表达：
  
  • T-bet：在Th1（#40）中高表达。
  • RORγt：在Th17（#36-39）中高表达。
  • GATA-3：在Th2（#43）中高表达。
    
    
  
  

参考文献：Jiang Q, Lindelauf C, van Unen V, van der Meulen-de Jong AE, Koning F, Pascutti MF. OMIP-110: A 37-Color Spectral Flow Cytometric Panel to Assess Transcription Factors and Chemokine Receptors in Human Intestinal Lymphoid Cells. Cytometry A. 2025;107(1):9-35. doi:10.1002/cyto.a.24914IF: 2.1 Q3