关于间标二抗的选择疑惑！！！急

kinsuo · 发表于 2012-1-10 12:22:09

本帖最后由 kinsuo 于 2012-1-10 16:24 编辑

要做多色流式，公司配的色。但有一个CD25要用间标，一抗是mouse anti pig CD25，间标二抗是PE goat-anti-mouse；然而其他CD Marker都是Mouse Anti-Pig的。这样配的话，CD25的间标二抗PE goat-anti-mouse，还能特异的和CD25的一抗结合吗，难道不会和其他CD的一抗结合吗？因为之前做过WB，知道二抗都是抗种属特异性的，难道这个流式的间标二抗不是这样吗？

kinsuo · 发表于 2012-1-10 14:17:29

忘了还有IgG的差别，但这样非特异性反应就多了，不好配啊！

haven_t · 发表于 2012-1-10 15:42:28

都是Mouse Anti-Pig的，二抗跟所有抗体都可以结合哦。

niwanmao · 发表于 2012-1-10 16:54:58

kinsuo 发表于 2012-1-10 14:17

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忘了还有IgG的差别，但这样非特异性反应就多了，不好配啊！

即使IgG亚型有差异，同种属之间还是会有结合的，不建议这样配。

kinsuo · 发表于 2012-1-10 17:38:49

haven_t 发表于 2012-1-10 15:42

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都是Mouse Anti-Pig的，二抗跟所有抗体都可以结合哦。

是这样的。卖抗体的说可以先把CD25标完了（洗完二抗），再标记其他的，我还要破膜标记Foxp3啊，这样就得把细胞折腾好几次，每次有做20多个样，真愁人！

kinsuo · 发表于 2012-1-10 17:54:15

niwanmao 发表于 2012-1-10 16:54

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即使IgG亚型有差异，同种属之间还是会有结合的，不建议这样配。

我也问了，他们说可以先标记CD25，洗完二抗再标记其他直标抗体，但是，还有Foxp3要破膜标记啊！！

niwanmao · 发表于 2012-1-10 21:06:39

kinsuo 发表于 2012-1-10 17:54

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我也问了，他们说可以先标记CD25，洗完二抗再标记其他直标抗体，但是，还有Foxp3要破膜标记啊！！ ...

一般说来，间标的效果肯定不如直标，CD25难道会没有直标的？

标完再破膜做FOXP3倒是问题不大。

haven_t · 发表于 2012-1-10 22:42:46

怎么要做猪的？CD25表达弱，间接标记效果不知道会不会影响，能不能买纯化抗体自己标记呢。

kinsuo · 发表于 2012-1-13 08:35:24

haven_t 发表于 2012-1-10 22:42

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怎么要做猪的？CD25表达弱，间接标记效果不知道会不会影响，能不能买纯化抗体自己标记呢。 ...

没办法，老板是搞这个的，文献中CD25几乎都是间标，有一个是自己做的直标抗体，但我不知道这个自己做效果好不好，操作可行性高吗？不过我最近还真看见一个视频仅需30s就标完了...

niwanmao · 发表于 2012-1-13 08:45:56

kinsuo 发表于 2012-1-13 08:35

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没办法，老板是搞这个的，文献中CD25几乎都是间标，有一个是自己做的直标抗体，但我不知道这个自己做效果 ...

现在抗体加标记应该是比较成熟的，都是kit在卖了。那个视频是我随手帮那位站友找的，http://www.flowcyto.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=1280

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