转染后的细胞周期检测

jingweis530

准备检测转染后的细胞周期，方法跟PI法测细胞周期的方法一样吗？乙醇固定过夜会因为时间长减低转染的荧光强度吗？请赐教，谢谢啦！

niwanmao

转染的是什么？gfp还是egfp还是其它？

jingweis530

转染是gfp，谢谢！

niwanmao

jingweis530 发表于 2012-1-11 14:52

                               
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转染是gfp，谢谢！

方法是一样的，GFP由于已经整合到细胞内表达了，所以荧光不会变的。

jingweis530

好，谢谢！

gcz5340

niwanmao 发表于 2012-1-11 16:57

                               
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方法是一样的，GFP由于已经整合到细胞内表达了，所以荧光不会变的。

不对倪老师，我做过实验，乙醇固定后GFP会淬灭的，就算没淬灭完表达率也会大大降低。用0.5-2%多聚甲醛(不同细胞株有差异）固定后再加乙醇，GFP表达才不会改变。

niwanmao

gcz5340 发表于 2012-2-15 22:44

                               
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不对倪老师，我做过实验，乙醇固定后GFP会淬灭的，就算没淬灭完表达率也会大大降低。用0.5-2%多聚甲醛(不 ...

哦，真的吗？谢谢您的反馈，你看，讨论的人多了，很多实际经验就都出来了。给您加2颗流星表达感谢。

我是从理论上推理的，表达GFP的细胞标记其它抗体我是做过，都没啥问题，所以认为做PI应该问题不大。但乙醇固定为什么会影响gfp的表达呢？难道乙醇固定之后会影响其表达？没理由啊，这GFP表达基因都整合到细胞的DNA中了啊。

jingweis530

上面的老师能给点具体的步骤吗？

niwanmao

niwanmao 发表于 2012-2-16 08:30

                               
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哦，真的吗？谢谢您的反馈，你看，讨论的人多了，很多实际经验就都出来了。给您加2颗流星表达感谢。

我 ...

找到资料了，原来是由于乙醇固定后会导致细胞膜受损，导致gfp漏出。我等一会儿把资料发到“流式protocol”版块。

niwanmao

jingweis530 发表于 2012-2-16 08:35

                               
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上面的老师能给点具体的步骤吗？

protocol详见：http://www.flowcyto.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=1331