关于cfse 检测细胞增殖的疑问

wenjinwu1985 · 发表于 2012-3-21 13:36:15

各位流式高手，最近小弟在做cfse检测淋巴细胞增殖的时候遇到些问题，能否烦请高手支支招呢，
在镜下检测细胞细胞的确增殖了，但是流式检测检测增殖指数只有1.多不知道为何

niwanmao · 发表于 2012-3-21 14:07:28

我觉得，镜下看到细胞多了和增殖不一定完全一致。
1、染色步骤是否正确？
2、分析是否正确？

wenjinwu1985 · 发表于 2012-3-22 09:35:04

倪老师：染色步骤参考的是我们论坛里面的染色的步骤

wenjinwu1985 · 发表于 2012-3-22 09:36:19

下面是我的原始数据

niwanmao · 发表于 2012-3-22 14:16:47

wenjinwu1985 发表于 2012-3-22 09:35

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倪老师：染色步骤参考的是我们论坛里面的染色的步骤

染色完毕之后，有没有继续培养？

niwanmao · 发表于 2012-3-22 14:22:24

wenjinwu1985 发表于 2012-3-22 09:36

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下面是我的原始数据

看了下你的数据，也不是说完全没有，只是代数分隔不清，没有典型的例子那么明显。
下图是他们官方典型的拟合图片：

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下面这张是你其中data.003和data.013两个图片：

wenjinwu1985 · 发表于 2012-3-23 13:25:31

哦！倪老师那么您有何好的建议吗？

niwanmao · 发表于 2012-3-23 14:01:24

wenjinwu1985 发表于 2012-3-23 13:25

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哦！倪老师那么您有何好的建议吗？

我只是帮以前有个研究生分析过，自己没处理过，而且，我不知道你处理的是什么细胞，染色之后培养了多长时间，所以没法给你一些实质性的建议。

ddn111 · 发表于 2012-3-26 22:11:05

看ＦＳ－ＳＳ图，是淋巴细胞吗？淋巴细胞增殖的话在淋巴群右上有大量的ＦＳ及ＳＳ增大的细胞，结果好像没有明显的增殖吧！做ＣＦＳＥ，建设用圆底96孔板试一试！

samly0 · 发表于 2012-3-27 16:11:10

不知道你镜下看到增殖是怎么样的，我以前用CFSE做淋巴细胞的增殖时，只有镜下看到折光性很好很亮，大部分淋巴细胞变大变圆的活化状态时，才会出现官方拟合数据那么明显的分代峰型，如果培养的淋巴细胞没有活化的话，就会出现想你那样的只有一个峰的状态，所以建议你先确定你培养的淋巴细胞是不是活化增殖了先。因为CFSE有一定的细胞毒性，我们实验室发现CFSE跟细胞孵育太长时间时，淋巴细胞很难活化，也很难出现理想的增殖峰。

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