PI单染检测细胞凋亡？求助

zdx0 · 发表于 2012-7-23 11:20:25

本帖最后由 zdx0 于 2012-7-23 11:21 编辑

大家好！如题，附流式文件（峰形图）。希望大家用各软件分析，交流结果，谢谢！

单染如何区分G1期前的亚峰呢？用单染做了几次，有空白的、给完药的。
根据modifit等软件分析，如何更好地划定峰的边界为好？

结果fcs文件.rar (2.66 MB, 下载次数: 16)

niwanmao · 发表于 2012-7-23 15:21:09

先分析了后面两个，感觉这细胞没分开，不知道你获取的时候是不是没有把G1峰设置在200 道的位置？是什么悬浮细胞还是贴壁细胞？前面两个也差不多，等有空时再分析。

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zdx0 · 发表于 2012-7-23 16:52:18

本帖最后由 zdx0 于 2012-7-23 16:53 编辑

niwanmao 发表于 2012-7-23 15:21

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先分析了后面两个，感觉这细胞没分开，不知道你获取的时候是不是没有把G1峰设置在200 道的位置？是什么悬浮 ...

用的是Hela细胞，上机检测后我在显微镜下看是有细胞结在一块，可能消化的不充分。
您为什么觉得没分开，是因为散点图里细胞区分不太明显吧？
为什么G1峰要设在200道，不怎么懂？

niwanmao · 发表于 2012-7-23 17:34:33

zdx0 发表于 2012-7-23 16:52

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用的是Hela细胞，上机检测后我在显微镜下看是有细胞结在一块，可能消化的不充分。
您为什么觉得没分开， ...

PE－W可见到细胞粘连比较明显，而且象上面两个峰之间，还有峰之前的凋亡峰跟G1峰靠在一起。

G1设在200道可以使G2/G1的比例更接近于2，分析拟合起来最好。

zdx0 · 发表于 2012-7-23 18:08:30

niwanmao 发表于 2012-7-23 17:34

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PE－W可见到细胞粘连比较明显，而且象上面两个峰之间，还有峰之前的凋亡峰跟G1峰靠在一起。

G1设在200道 ...

嗯，下次重复时改进一下减少粘连。
若空白的和给药的按如上分析，空白的凋亡率还高些。第一个图，您怎么确定G1 峰的划定呢？我用flowjo也试了一下，但是感觉确定不了G1峰？

niwanmao · 发表于 2012-7-23 20:40:37

zdx0 发表于 2012-07-23 18:08:30

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[quote]niwanmao 发表于 2012-7-23 17:34 [url=forum.php?mod=redirect&go

同一批标本，根据空白定下G1峰之后，基本上就不需要动。范围的话用MoDFIt不需要定。

huzengwu · 发表于 2012-7-23 21:35:25

niwanmao 发表于 2012-7-23 20:40

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同一批标本，根据空白定下G1峰之后，基本上就不需要动。范围的话用MoDFIt不需要定。 ...

倪老师，我今天做细胞凋亡的时候，做的是骨髓干细胞，传代传了三代，然后用激素刺激凋亡，PI和V染色，最后结果显示一二通道点图是斜着飘上去的，就是45度角差不多，V-fitc单阳性细胞也很散，老师觉得这是什么情况？

niwanmao · 发表于 2012-7-23 21:54:53

huzengwu 发表于 2012-07-23 21:35:25

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[quote]niwanmao 发表于 2012-7-23 20:40 [url=forum.php?mod=redirect&go

干细胞是贴壁的吧？这个要么是荧光太高，要么就是细胞状态问题。如果实在调不下去，可以尝试斜向十字门

zdx0 · 发表于 2012-7-30 18:34:15

niwanmao 发表于 2012-7-23 20:40

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同一批标本，根据空白定下G1峰之后，基本上就不需要动。范围的话用MoDFIt不需要定。 ...

倪老师，您用过其他的软件分析分析凋亡吗？也是单染的。

niwanmao · 发表于 2012-7-30 19:14:50

zdx0 发表于 2012-7-30 18:34

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倪老师，您用过其他的软件分析分析凋亡吗？也是单染的。

其它软件没分析过。直接划分会偏差比较大，最好还是使用这些成熟的软件，成熟的模型来拟合。

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