有人遇到这种情况么？？

bluefishcyl

实验是这样的，我要检测的是两个细胞表面因子表达，由于没有直标抗体，故选择间标，用FITC和Cy3
用阴性细胞调好电压后，上FITC的单染管，发现细胞成一群，直接落在阴性区域内。
故判断，可能没有染上！所以也没有调补偿。
回去显微镜观察，发现应该是弱阳性，ISO调到800，曝光1min30s，背景都是绿色的。
请问到底出了什么问题？？？应该怎么办？

haven_t

信号太弱,所以只能延长曝光时间,造成背景噪声过大.我的经验是曝光超过30秒背景就很高,你用张白片以同样的曝光时间和iso试一下就知道了.

niwanmao

问题的第二部分荧光显微镜激发我不太了解，针对前面部分，我想了解一下你的处理步骤。

bluefishcyl

我想知道，对于弱的荧光，流式细胞仪有没有可能在调高电压的情况下都检测不到？？？

niwanmao

bluefishcyl 发表于 2012-8-19 21:17:04

                               
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我想知道，对于弱的荧光，流式细胞仪有没有可能在调高电压的情况下都检测不到？？？

对于弱表达的抗原，流式是可以区分开来的，关键还是最好选择pe、apc这类强的荧光标记

marshlin

haven_t 发表于 2012-8-15 23:37:22

                               
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信号太弱,所以只能延长曝光时间,造成背景噪声过大.我的经验是曝光超过30秒背景就很高,你用张白片以同样的曝光时间和iso试一下就知道了.

这位老师说的很对。我不了解您的实验，但我们做荧光染色时时弱的荧光在显微镜下看不到，在流式是可以检测到的。