设门不起作用

renping_jsnj

实验目的是检测wholeblood中B cellactivation ， 软件是cellquest。左图FSC/ssc圈选出淋巴细胞，no gate; 右图B220标记B cell， CD86标记activated cell，G1=R1。
问 题来了，B220的表达是连续的，没有分开两个群，这与之前的认识不相符。后来偶然移动了R2的位置，发现原来是其他细胞的影响，如第二行的图，R2移到 中间时，主要是粒细胞群。感觉前面设的G1=R1没有起作用，R1以外的细胞还是进来了。重新画了模板也还是这样，不知道是什么原因。
有没有老师遇到过这种情况，如何解决的？谢谢。

niwanmao

renping_jsnj 发表于 2012-8-30 14:32

                               
登录/注册后可看大图

为什么我在画右图的时候选了G1=R1，它还是显示全部细胞呢？

这个是正常的啊，并不是设门没用。
门其实就象显示上的过滤器，右图它只是在显示上把R1以外的点屏蔽掉了，实际上右图你所设的R2这个区域还是有其它点存在的，只是因为你只圈了R1这个范围，所以它们不显示出来。但你在右图圈R2时，反过来在no gate的左图上看，当然会看到把R1以外的绿色。
如果你把左图也设为R1，那么肯定就看不到R1以外的绿色了。

所以这里面其实就是一个逻辑门的概念，单单圈R2，肯定会多多少少包含R1以外的信号，如果设置为R1 AND R2，那么就是只包含R1以内的信号，不会存在R1以外的信号。

haven_t

右图显示的是全部细胞，所以R2 也是在No Gate 下设立的，和R1无任何关系。建议右图显示R1 细胞，然后再设R2，这样两个门就是父与子的关系。这一点Cellquest和Diva不一样，我也会经常犯错。

renping_jsnj

haven_t 发表于 2012-8-30 14:10

                               
登录/注册后可看大图

右图显示的是全部细胞，所以R2 也是在No Gate 下设立的，和R1无任何关系。建议右图显示R1 细胞，然后再设R2 ...

我刚才试了一下，先画FSC/SSC,R1,G1=R1；然后画FL1/FL2,十字,R2,G1=R1。结果是左图只显示R1内的细胞，可右图还是老样子。是不是我理解的不对，还请haven_t老师再详细说明一下。非常感谢。
RP

renping_jsnj

为什么我在画右图的时候选了G1=R1，它还是显示全部细胞呢？

renping_jsnj

不好意思，可能我画个R2，把问题弄复杂了，也没说明白自己想要达到的目的。在我的实验目的中是不需要用到R2的。我只是想要右边的图只显示R1里的细胞，这样B220就不会受到粒细胞的干扰，表现出来两群分的开开的细胞，让右图看起来清楚明白。

niwanmao

renping_jsnj 发表于 2012-08-30 15:43:11

                               
登录/注册后可看大图

不好意思，可能我画个R2，把问题弄复杂了，也没说明白自己想要达到的目的。在我的实验目的中是不需要用到R2

这样恰恰说明了多个门逐级设门时，统计数据是要用逻辑门gate，不能直接用region

haven_t

renping_jsnj 发表于 2012-8-30 14:32

                               
登录/注册后可看大图

为什么我在画右图的时候选了G1=R1，它还是显示全部细胞呢？

太久没用cellquest了，倪兄应该是正解，cellquest没有门继承的概念，所以要用逻辑运算代替。

renping_jsnj

看了倪老师的讲解，再把图上的gate来回移动几个位置，终于明白了。谢谢。

niwanmao

renping_jsnj 发表于 2012-8-31 17:25:16

                               
登录/注册后可看大图

看了倪老师的讲解，再把图上的gate来回移动几个位置，终于明白了。谢谢。

恭喜，确实需要靠实践，我那天讲解得自己都不知道有没有讲明白，呵呵