请教关于抗体问题

suwijolg

倪老师：请教一个问题
我的一急淋病人，做胞膜CD3强表达，但是用三色抗体（即mpo/cd79a/cd3）做胞浆标记，结果胞浆没有表达cd3。我怀疑是抗体有问题，于是在标记cd45后，再固定破膜，再用原先标记胞膜的抗体cd3标记。却做出阳性结果来。我疑惑的是：这个阳性结果是算胞膜的还是胞浆的？还是两者都有？试剂是beckman的。打电话问了beckman方面，说是算胞浆的，因为固定破膜后，膜表面便不能结合抗体了。这个解释有问题吗？具体原理是如何呢？

niwanmao

如果胞膜有表达，胞内肯定是有的，除非这个抗体是只针对胞膜位点，而不针对胞内位点。
不知道你用的是哪个克隆号？

maluqi

我也是用一样的贝壳曼三色破膜的试剂，cCD3都挺理想。B淋巴细胞的79a或粒细胞mpo有做出来吗，如果没有那可能是破膜没做好。第二次虽然有做固定，但固定后胞膜的也可以结合，所以阳性是包括了胞膜和胞浆的。

maluqi

如果要避开胞膜的结合，需要用不带荧光素的CD3纯抗体先封闭，然后再破膜做胞浆的。