细胞周期的G2峰没有

lily7a26 · 发表于 2012-10-10 10:15:30

我的细胞是乳腺癌细胞转染之后72h消化去测的细胞周期，六孔板转染，细胞数量不是很多，所以收样的时候用的是高速收集10000个细胞，结果的出来的细胞周期G2的峰几乎没有，modfit自动分析不出来，我上传了原始结果，在压缩文件里，2是对照，3是转染高表达空载体，4是高表达质粒，5是干扰的空载体，6是干扰的质粒。为什么会出现这种情况？求高手帮我看看，这个是加了PI之后一个多小时测的，因为我们自己没有机器，要去外面做，可以看到对照还是有个小小的G2峰，后面重做了一次，等了四个小时才检测，所有的组都没有G2了，跟后面转染的情况一样的，我是消化后乙醇4度固定了4个小时，加PI的。PI的配方是用的加柠檬酸三钠的配方。求指点啊

niwanmao · 发表于 2012-10-10 10:15:31

大致看了下，2、4、6都能拟合出G2峰，但3和5拟合不出G2峰，不过3和5肉眼看肯定不会是0，多少会有一点，可能需要细调G2/G1的比例，我想之所以如此，应该跟你获取数量少、获取速度过快有关，另外，你在获取时是否调整过FL2的电压？

niwanmao · 发表于 2012-10-10 11:08:14

中午回去开电脑看看

lily7a26 · 发表于 2012-10-10 14:00:35

niwanmao 发表于 2012-10-10 13:43

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大致看了下，2、4、6都能拟合出G2峰，但3和5拟合不出G2峰，不过3和5肉眼看肯定不会是0，多少会有一点，可能 ...

对照的时候电压调好了，后面的都没有调了，直接测的。

lily7a26 · 发表于 2012-10-10 14:12:56

niwanmao 发表于 2012-10-10 13:43

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大致看了下，2、4、6都能拟合出G2峰，但3和5拟合不出G2峰，不过3和5肉眼看肯定不会是0，多少会有一点，可能 ...

我想知道会不会跟我染色时间太长有关，或者配方里有柠檬酸三钠会不会影响呢？

niwanmao · 发表于 2012-10-10 17:51:35

lily7a26 发表于 2012-10-10 14:12:56

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我想知道会不会跟我染色时间太长有关，或者配方里有柠檬酸三钠会不会影响呢？

染色时间长大多数造成细胞粘连增多，或者荧光减弱。不知道你为什么加柠檬酸钠？柠檬酸钠是否会影响不是很清楚，但是你染液的配方最好调整到正规配方，具体可查询站内资源。

lily7a26 · 发表于 2012-10-31 09:37:11

谢谢老师，我最后发现我用的是低渗法的染液配方，不需要固定，固定之后细胞不知道为什么就会出现这种问题，不固定就好了，还是谢谢老师的帮助。

niwanmao · 发表于 2012-10-31 12:15:16

lily7a26 发表于 2012-10-31 09:37

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谢谢老师，我最后发现我用的是低渗法的染液配方，不需要固定，固定之后细胞不知道为什么就会出现这种问题， ...

不固定做不出细胞周期的，即使看到一点峰也是不准确的。
正确的细胞周期的检测步骤见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1330-1-1.html

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