使用JC-1检测线粒体膜电位

yationz

niwanmao 发表于 2012-12-19 09:10
一般可以适当调节，以便使正常细胞在fl1/fl2散点图上位于右上且呈椭圆形，发生线粒体膜电位降低的细胞，会 ...

老师，您好，我才开始做流式检测线粒体膜电位方面的实验，荧光探针也是JC-1，仪器的BD C6，样品是肿瘤细胞，但是做出来的结果发现FL1没有略微上升，反而是略微下降，在给药（包括阳性对照cccp）后30min发生转移，24h时和30min相比所有细胞团FL1都发生了略微下降，也就是在右上象限内细胞团都向左发生了略微偏移，这个和您说的以及我之前在网上调研的都不太相符，不知道是不是因为我的补偿没有调好或者没分析对的原因，FL2倒是有向下拖尾的现象，不是很明显，而且可能由于补偿原因感觉像是被削掉了一部分，用FL1补偿FL2之后可以调好，但是每个时间点或浓度点感觉补偿都有点不同。希望您能给我点建议，非常感谢！

a2782953

alina1123 发表于 2012-12-19 08:22

                               
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倪老师，请问这个绿光和红光之间是不是应该调节补偿呢？CCP处理后的全部是绿光（用来调节PE-FITC）？正常细 ...

根据我用小鼠精子做实验的情况来看，并不是说CCCP处理后全部是绿光，与处理前相比，而是非常非常淡的绿光，当然，处理后的红色也是非常非常淡的红色。正常细胞在激发光下应该是全部会发出红色光，但是如果你观察绿色荧光的话，绿色荧光同样会比较强。并不像某些文章中所说的那样----线粒体膜电位高，红光强，绿光弱；线粒体膜电位地，红光弱，绿光强。根据我的观察来看，反而是这样的---红光强的话，绿光也会强。

alina1123

倪老师，请问这个绿光和红光之间是不是应该调节补偿呢？CCP处理后的全部是绿光（用来调节PE-FITC）？正常细胞全部发红光（用来调节FITC-PE）？是这样的吗？

niwanmao

alina1123 发表于 2012-12-19 08:22:34

                               
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倪老师，请问这个绿光和红光之间是不是应该调节补偿呢？CCP处理后的全部是绿光（用来调节PE-FITC）？正常细

一般可以适当调节，以便使正常细胞在fl1/fl2散点图上位于右上且呈椭圆形，发生线粒体膜电位降低的细胞，会发生fl2降低而fl1略增高，即往下产生拖尾

niwanmao

a2782953 发表于 2013-7-30 23:06

                               
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根据我用小鼠精子做实验的情况来看，并不是说CCCP处理后全部是绿光，与处理前相比，而是非常非常淡的绿光 ...

感谢分享经验。可能在荧光显微镜下处理前后差别比较轻微吧。
在流式上应该是比较明显的。

vetzcm

a2782953 发表于 2013-7-30 23:06

                               
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根据我用小鼠精子做实验的情况来看，并不是说CCCP处理后全部是绿光，与处理前相比，而是非常非常淡的绿光 ...

我也观察到和你看到的一样的情况，那个正常细胞红绿荧光都有啊 会不会是细胞状态或处理过程造成的啊

bingxuesong

倪老师，我也用JC1测PBMC的MMP，横坐标FITC-H，纵坐标PE-H，PE调整了补偿，用CCCP处理后细胞基本都位于Q4,提示绿色荧光，未用CCCP处理的待观察细胞，根据CCCP射门，显示Q2为主（红色），其次是Q4，还有一些在Q3。请问根据您的经验，这种图是够合理？

niwanmao

bingxuesong 发表于 2014-04-02 12:45:37

                               
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倪老师，我也用JC1测PBMC的MMP，横坐标FITC-H，纵坐标PE-H，PE调整了补偿，用CCCP处理后细胞基本都位于Q4,

能否把图传上来？

泪落伤心时

a2782953 发表于 2013-7-30 23:06
根据我用小鼠精子做实验的情况来看，并不是说CCCP处理后全部是绿光，与处理前相比，而是非常非常淡的绿光 ...

您好，我也是作精子方面的内容，想咨询一下，在流失测定膜电位的同时，需要检测细胞死亡情况吗？