抗体标记问题

violet870807

1是染了B220-Percp,MHCI-FITC,MHCII-PE,2是CD11c-APC,MHCI,MHCII,3是CD4-FITC,CD8-Percp，CD25-PE,Foxp3-APC,B是没染的细胞。

niwanmao

violet870807 发表于 2012-10-22 14:14

                               
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1是染了B220-Percp,MHCI-FITC,MHCII-PE,2是CD11c-APC,MHCI,MHCII,3是CD4-FITC,CD8-Percp，CD25-PE,Foxp3-AP ...

分析了下，觉得有以下问题：
1、PERCP通道（一般是FL3）电压过低，如下图中，G1细胞共77％，而G2只有27％，说明有50％左右的细胞在坐标轴下方。

sample3

2、CD4分群不清，而CD8我估计调高电压可能分群也不一定清楚，由于你这管是FOXP3的，经过破膜处理的，所以我建议你在不破膜的情况下再做一次淋巴细胞。如果还是这样，就可以肯定是抗体质量问题，如果不破膜的情况下CD4、CD8分群很清楚，就说明是破膜中出了问题。看分群是否清楚，可参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1596-1-4.html

violet870807

谢谢，不破膜CD8也不好。

niwanmao

violet870807 发表于 2012-10-22 23:06

                               
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谢谢，不破膜CD8也不好。

那么可以拿着数据，叫他们技术支持过来，申请退货或者调换新的批号。不过最好先把电压调整好，否则这个地方还是有点理亏的，人家可以说是你电压没调好的问题。