小问题

vtea · 发表于 2012-12-4 21:22:23

最近做了个流式，有小问题请教大家。
1.淋巴细胞圈门时为什么出现两群？用哪种圈法呢？
2.cy5的补偿如何能调好呢？（图4）我想标出B cell，做了两次(染四种颜色：FITC, PE ,CY5， APC)，每次用cy5的抗体，无论B220还是CD19，都不能分出两群细胞，可是调补偿的时候已经是可以了啊，至少看上去可以（没有图可以传……）.很想知道该怎么做？不然那两只几千的CY5-B220&CD19就没用了……

niwanmao · 发表于 2012-12-4 21:56:13

1、三种不同的圈门方式，相应的抗原表达图能否再传上来看看？

2、不知道你用的是什么机器？如果是bd的机器，cy5和apc的补偿好像没法调节的，两者荧光几乎重叠的。你试着把点图的参数改为cy55和apc看看。

vtea · 发表于 2012-12-6 13:05:43

谢谢倪老师，我用的是bd的FACSCalibur，如果实在调不好CY5的抗体就只能另找机器才能用啦

不同圈门的抗原表达差不多的，我的老师说可能因为实验用鼠年龄太大的缘故，才导致淋巴细胞分成两群。是这样的吗？

niwanmao · 发表于 2012-12-6 13:52:29

vtea 发表于 2012-12-6 13:05

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谢谢倪老师，我用的是bd的FACSCalibur，如果实在调不好CY5的抗体就只能另找机器才能用啦
不同圈门的抗原 ...

你用的染料应该是APC和CY5吧？两种都是633激发的，发射波长实在太接近了，分别是660nm，666nm。应该调节不好补偿的，你是不是取的时候把FL4－FL3的数值设置的非常非常大？
建议更换一下B220的荧光标记吧。

vtea · 发表于 2012-12-6 14:28:20

niwanmao 发表于 2012-12-6 13:52

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你用的染料应该是APC和CY5吧？两种都是633激发的，发射波长实在太接近了，分别是660nm，666nm。应该调节 ...

的确是这样子的……只能换染料了和配色方案了~

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