初学者请教Th1/Th2/Th17/Treg细胞的测定

jennykuner

各位前辈老师：我是初次接触流式，看了一些资料，许多概念不太明白，想请教几个问题，请不要见笑：
1.我需要测定外周血及腺样体组织中的Th1/Th2/Th17/Treg的绝对值及两两比值，我看了张明霞老师的PPT，理解这四个亚群可以用同一份标本，刺激后进行多种荧光标记后同时上机测定，是这样吗？
2.如果是，那么我疑惑的是其他文献中大多进行分别测定，Th17需要刺激培养，Treg可以不刺激培养，那么如果我一起都经刺激后染色，会不会对Treg有影响？
3.如果是，那么最少的外周血样本是多少呢，是不是5ml就可以够呢？
4.对Th1/Th2/Th17/Treg的测定，按张明霞老师的课件，我理解为用CD3，CD8标记细胞表面，INF-γ,IL-4，IL-17，Foxp3分别标记Th1/Th2/Th17/Treg，通过不同设门，进行分析各亚群比值，那么可以直接得到这四种细胞因子的定量吗？

niwanmao

1、只要你的机器可以检测的颜色数足够多，是可以放在一管的，当然，也可以放在多管里面测。
2、我印象中似乎也看到有文献说进行刺激后做TREG，应该没问题，具体出处有点忘了。
3、最少说不好，但是5ml肯定是够的。
4、如果做Treg，是不是应该再加上CD25？做细胞因子定量就还得加定量微球，可就复杂了。@Mia_day  

jennykuner

niwanmao 发表于 2012-12-28 22:53

                               
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1、只要你的机器可以检测的颜色数足够多，是可以放在一管的，当然，也可以放在多管里面测。
2、我印象中似 ...

谢谢老师！我明白了很多，我准备看看机器能不能一起做，不行就分两管做，Th1/Th2一管(用CD3，CD8，INF-γ,IL-4标记)，Th17/Treg一管（用CD3，CD25，CD8，IL-17，Foxp3标记）。倪老师，能不能弱弱的再问一下：如果这样分别测的话不知道还能得到Th1/Th17，Th2/Th17比值图吗？

niwanmao

jennykuner 发表于 2012-12-30 20:23

                               
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谢谢老师！我明白了很多，我准备看看机器能不能一起做，不行就分两管做，Th1/Th2一管(用CD3，CD8，INF-γ ...

你所谓的“Th1/Th17，Th2/Th17比值图”是指计算两者之间的比例比？还是想将它们的直方图叠加？都是可以的啊。

jennykuner

niwanmao 发表于 2012-12-30 20:34

                               
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你所谓的“Th1/Th17，Th2/Th17比值图”是指计算两者之间的比例比？还是想将它们的直方图叠加？都是可以的 ...

明白了，老师，谢谢老师！我需要再仔细研究一下上机测定。

Mia_day

jennykuner 发表于 2012-12-30 20:23

                               
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谢谢老师！我明白了很多，我准备看看机器能不能一起做，不行就分两管做，Th1/Th2一管(用CD3，CD8，INF-γ ...

倪老师说的很详细哦~如果只想检测样本中Th1/Th2/Th17/Treg的细胞群比例像上述方法进行胞内染色就可以了~但是如果想要检测细胞因子的含量，要收取细胞培养上清或者病人/小鼠 血清，是需要使用BD CBA流式技术进行检测的（专门的Th1/Th2/Th17检测试剂盒），也是倪老师刚才提到的定量微球的技术

Mia_day

以下是CBA技术的简单说明，供参考