抗体滴定实例

niwanmao

本图来自于多色流式优化方案6：人Treg表型亚群分析，是针对Helios和foxP3的抗体滴定。

一般说来，抗体滴定后，大多确定SI（染色指数）或S/N（信噪比）最高的浓度，但有时候也要考虑一下抗体用量，见下图：

PBMC的抗体滴定

niwanmao

immunology 发表于 2020-4-29 23:19
倪老师好，我看1楼您的主贴上Helios的阳性细胞数似乎还在随着抗体浓度而增加，是否可以认为抗体的浓度还是 ...

不知道你有没有注意到Helios那个图，最高的浓度，阴性群的分布也宽了，这就意味着再加上去，S/N比肯定会降下来，而且再加上去只会增加抗体成本。而次低的浓度已经足够将Helios阳性群分开了。
最高浓度的比例看上去增加了，实际上并不是真增加而是把阴性部分圈了一点进去。

染色体积越小，抗体浓度越高，但是否越高越好，这是有限度的，就如同上面抗体滴定一样，太高容易导致非特异性染色，导致阴性群SD增大，最后信噪比反而低。

angelsigh103

您好 我想问一下 Negmed是什么意思呢

特勒兮兮

我也想问一下Negmed是什么意思

niwanmao

特勒兮兮 发表于 2019-6-12 16:48
我也想问一下Negmed是什么意思

看OMIP006的Support Information就知道，Neg Med是指阴性细胞群的平均荧光强度。

immunology

倪老师好，我看1楼您的主贴上Helios的阳性细胞数似乎还在随着抗体浓度而增加，是否可以认为抗体的浓度还是低了？
另外MFI似乎到达了平台期，但是阳性细胞数仍然增加，这种情况可能是由什么原因导致的？
抗体滴定不用管阳性细胞数是否增加吗？只看MFI到没到平台期及SI或信噪比的高低？

另外我看Ruud在一文中提出了一个新的观点，认为可能由于抗原/抗体动力学的原因，在用传统方法找到针对一定数量细胞的抗体总量的情况下，染色体系越小越好，抗体浓度越高越好（我应该没理解错吧），请问您怎么评价这个观点？
详见https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2484-1-1.html

范晋波

niwanmao 发表于 2020-4-30 11:11
不知道你有没有注意到Helios那个图，最高的浓度，阴性群的分布也宽了，这就意味着再加上去，S/N比肯定会 ...

倪老师，是否每一个抗体都要做滴定，我觉得那样会很麻烦，是不是关键性抗体坐下滴定就可以

niwanmao

范晋波 发表于 2020-5-6 14:22
倪老师，是否每一个抗体都要做滴定，我觉得那样会很麻烦，是不是关键性抗体坐下滴定就可以 ...

严格的做法，是每个都要的。
但确实像你所说的那样，从性价比出发，对于CD3、CD4、CD8这类分群明显且间隔非常开、只做细胞性质确定设门用的时候，可不滴定，只去滴定那些需要分析比例或MFI的指标。