同型对照的marker端点怎么确定才准？

FCS

最近跑了CD45-PE的样，同型对照是IgG1-PE，用FCS express overlay后发现，M1的位置很难定
如果isotype的M1值为0.11%，那么样品的M1值为6.32%；
如果isotype的M1值为1.05%，那么样品的M1值为27.02%.相差很大！
请问哪个位置才对？或者都错？同型对照的阳性值一般在哪个范围？
谢谢！

niwanmao

同型对照的阳性、阴性分界点确定确实是个问题，有些人以1％为标准，有些人以0.5％为标准。
而在实际工作中，觉得有时候如果出现一定量的非特异性染色，就容易使同型对照的阳性率增高，导致marker放置不准确，我的做法就是如下图所示：将同型对照的右曲线最末段按假想的弧度延伸，与X轴交叉点做为阳性marker的起点。

同型对照的分界确定

不知道其它站友那边如何确定，一起来讨论讨论！