这PBMC里的淋巴细胞圈的对吗？Treg阳性率很低为什么？

appledied

最近刚开始做流式，主要做CD4+T细胞的，Th1\2\17和Treg的
但是做了好几次都不好。。

之前因为标本都是冻存的，状态本身就不好
这次用了一次新鲜的，想先问个基础的问题，我圈的淋巴细胞是否正确？
第一张图是新鲜的PBMC的流式，第二张是一般冻存之后的PBMC，我感觉这个淋巴细胞的gate基本上看不出分群啊。。

我做了很多次，但是Treg的阳性率很低，不知道什么原因呢？

niwanmao

淋巴细胞的设门正确。pbmc你怎么冻存？

treg的foxp3染色确实很有难度，而且与你的抗体克隆很有关系，建议抗体克隆和步骤参考一下
http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=2104

appledied

就是用配好的冻存液（DMSO和FBS 1:9配置），然后用的时候37度水浴快速解冻，之后会培养过夜，然后第二天染色。。。不好意思，什么叫抗体克隆呢？老师你发的链接我看不了。。。我们的抗体用的都是ebioscience的。。。
还有，已经冻存过的细胞券淋巴是不是就只能在大致位置这么gate一下呢？
谢谢！

niwanmao

appledied 发表于 2013-4-25 20:52

                               
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就是用配好的冻存液（DMSO和FBS 1:9配置），然后用的时候37度水浴快速解冻，之后会培养过夜，然后第二天染 ...

嗯，冻存液应该没有问题。那可能是没有办法的FSC改变，设门可以这么圈，因为你圈中了这个区域就是淋巴细胞区域。
刚才用手机回帖，所以有些代码显示不正确，现在链接已修正。
抗体的克隆号在产品说明书上有写的。

rogasan

新鲜血采集的时候未设置适当的threshold值，所以细胞碎片之类的都采进了....

另Treg阳性率太低， 有时需要考虑是否用二抗同种血清封闭过， 不封闭的话，阳性率也会很低...