细胞分选，选什么样的磁珠

边陲小城

各位前辈，小弟新手，多多指教哈
最近要提纯小鼠的胆管上皮细胞，文献里报道用磁珠分选的方法，但没有明确细胞表面的抗原是啥，只知道Rat IgG2a可与之结合，如果用磁珠应该选什么样的呢？是用包被有Rat IgG2a的磁珠，还是先用Rat IgG2a与细胞结合，再用anti  Rat IgG2a的磁珠，再或是用PE标记的Rat IgG2a与细胞结合，再用抗PE的磁珠呢（因为前两者好像没有这样的产品）？ 感觉很困惑。。

刘星宇

抗体公司应该有相应的介绍

niwanmao

是否可把那篇文献传上来？

边陲小城

@niwanmao 倪老师，文献已上传，其中第2篇是第1篇引用文献之一

niwanmao

边陲小城 发表于 2013-5-17 19:15

                               
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@niwanmao 倪老师，文献已上传，其中第2篇是第1篇引用文献之一

这篇文献中说用CK7免疫组化检测分离的胆管上皮细胞纯度是95－100％，我觉得可能会不会是用IgG2a来源的CK7抗体？
你看Liver Transplantation上的一篇文献就是用CK19抗体做免疫亲和分离的：Cholangiocytes were isolated by immunoaffinity separation with the specific cellular surface marker cytokeratin 19 as described by Gigliozzi et al  
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/lt.21985/pdf

边陲小城

niwanmao 发表于 2013-5-17 21:33

                               
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这篇文献中说用CK7免疫组化检测分离的胆管上皮细胞纯度是95－100％，我觉得可能会不会是用IgG2a来源的CK7 ...

感谢倪老师的解答~这两天在看你提供的这篇文献以及相关的参考文献，仍然没有得到确定的答案（ps由于磁珠分选太昂贵，不得不小心。。。）
1，就我所知，CK19 或者7是细胞骨架蛋白，除了这篇liver transplatation的文章外，没找到CK19或7是细胞表面标记的证据，（包括所引用Gigliozzi的文章以及里面的参考文献）
2，还是说磁珠分选不一定用表面的标记？
3，看其他的文献，基本用来分选的抗体都是被赠予的，而且其他大部分文章关于分离方法的引用都来自上次传的第2篇文献，难道出售的IgG2a与其用来分选的IgG2a不同?

niwanmao

边陲小城 发表于 2013-5-20 16:11

                               
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感谢倪老师的解答~这两天在看你提供的这篇文献以及相关的参考文献，仍然没有得到确定的答案（ps由于磁珠 ...

我认为有99％的可能是CK7，你看啊，仔细阅读你加亮的这句话：
Isolated cholangiocytes (95–100% pure by CK-7 immunohistochemistry) were obtained by immunoaffinity separation24,28,29 with a monoclonal antibody, rat IgG2a (provided by Dr R Faris, Providence, RI, USA), against an antigen expressed by cholangiocytes

重点就在加粗的这些单词和红色的单词上，它这个IgG2a肯定不是同型对照的抗体，而是针对胆管上皮细胞的某个抗原，但为什么不直接说出抗原名称，我就不知道，但作者分离后用CK7免疫组化来验证其纯度，这就证实这个针对的antigen极有可能就是CK7。否则为什么用CK7验证纯度？你说呢