细菌syto9染色的电压调节

wsnxbdr

金黄色葡萄球菌的纯菌液（冲悬于PBS，浓度约10e5CFU/ml）。没有灭活，所以基本都是活菌，syto9染色。
我的FL1电压值在从6.5降到5的过程中，FL1的直方图有明显变化。
6.5时左边有很明显的背景和噪音，随着电压的降低，背景和噪音变小，降到5时就变成了只有样品的一个峰。这一过程中样品峰的计数数值都是6000左右，虽然有所变小，但不明显。
我想问：这种情况我应该把电压设成6.5，还是5。
如果是设成5好的话，如果样品有部分灭活的细菌，又加入了PI做死活染色，因为PI会使syto9的染色降低，而我是用FL1触发的，会不会有很多死菌因为PI导致的绿光减弱而无法触发。我到觉得是会的，但还没有实验验证。

dragonhzqsmmu

SYTO9应该是死活都能染色的，你是否做过PI负染？
建议参考这个链接里面的protocol方法

http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... =%E7%BB%86%E8%8F%8C

niwanmao

直方图不好，建议用散点图看。

wsnxbdr

niwanmao 发表于 2013-6-24 10:27

                               
登录/注册后可看大图

直方图不好，建议用散点图看。

我最后是会用散点图看，散点图我没有放上来，图中有一个集中的区域，是与直方图的那个峰对应的。不过电压高时（如6.5），集中区域的下方偏左（即靠近0点）也会有很多背景和噪音的点，电压降低，这些点逐渐减少，到电压5时很少了，而那个集中的点区，其计数结果变化不大，并与直方图的峰相一致，毕竟只是纯菌液嘛。
所以即使用散点图看，我还是要问这个问题，在保证能得到想要的结果的条件下，电压是高一些好还是低一些好，或者说我有没有必要把背景和噪音降到最少。谢谢

niwanmao

wsnxbdr 发表于 2013-6-24 13:44

                               
登录/注册后可看大图

我最后是会用散点图看，散点图我没有放上来，图中有一个集中的区域，是与直方图的那个峰对应的。不过电压 ...

如果确认左下方的信号是噪音或干扰信号，那么就可以通过threshold（阈值）设置将这些信号排除掉。至于电压，以平时检测的水平为佳，尽量不调。

Shura

请问一下您的样本有经过什么样的处理么？金黄葡萄球菌不是成串，怎么分离成单个的呢？