有人用细胞周期检测subG1么？

chilliping · 发表于 2013-7-9 11:32:03

大家检测细胞周期的时候有没有这种情况，
相同的样本凋亡试剂盒检测的时候是有一定比例凋亡的，但是用细胞周期的方法却检测不到subG1？

niwanmao · 发表于 2013-7-9 11:41:09

这两者肯定不是等同的，凋亡分早期、中期、晚期事件。AV＋是早期事件，而caspase家族活化，最后导致DNA降解是晚期事件，所以两者不同步是正常的。

chilliping · 发表于 2013-7-9 12:19:31

也就是说只有晚期凋亡出现，DNA开始降解之后subG1才开始出现？

niwanmao · 发表于 2013-7-9 14:25:27

chilliping 发表于 2013-7-9 12:19

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也就是说只有晚期凋亡出现，DNA开始降解之后subG1才开始出现？

凋亡事件的发生时序可以参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1535-1-1.html
该ppt很详细。

chilliping · 发表于 2013-7-9 17:03:55

谢倪老师，你总是出现在我最需要的时候，哈哈

gotofcm · 发表于 2013-7-10 17:08:29

也可以用这个方法做，但要用DNA EXTRACT BUFFER提取凋亡细胞中的小片段DNA，然后再染色。小片段DNA跑电泳，两者相互验证。
可以参考一下这个说明书：http://www.gotofcm.com/Web2004V2/datasheet/lianke/CCS013.pdf
不好意思，忍不住宣传一下产品，希望对您有用。

cccssszzz08 · 发表于 2013-7-11 08:01:45

Sub G1就是指已经不是二倍体的DNA了吧，定义为DNA损伤断裂的小片段。并不是所有的凋亡都会有这个的。而且用SubG1来评定凋亡，貌似现在有很多人都不怎么认可。

chilliping · 发表于 2013-7-11 09:54:41

cccssszzz08 发表于 2013-7-11 08:01

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Sub G1就是指已经不是二倍体的DNA了吧，定义为DNA损伤断裂的小片段。并不是所有的凋亡都会有这个的。而且用 ...

我也这么理解，他们投了一篇文章，评审问为啥subG1跟凋亡结果不符，想想还是谨慎咨询下大家

chilliping · 发表于 2013-7-11 09:55:20

gotofcm 发表于 2013-7-10 17:08

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也可以用这个方法做，但要用DNA EXTRACT BUFFER提取凋亡细胞中的小片段DNA，然后再染色。小片段DNA跑电泳， ...

我看看，谢谢！

gotofcm · 发表于 2013-7-11 22:54:28

凋亡细胞中含有小片段的DNA，用DNA抽提的buffer抽提后，凋亡细胞中的小片段DNA被抽提出来，DNA含量变少，PI染色后上流式就会出现sub-G1峰。但由于细胞碎片或者核碎片都会在G0G1峰前出现一个假的sub-G1峰，所以很多时候无法分辨是不是真的凋亡峰。但抽提出来的含小片段DNA的上清，跑电泳，会得到梯状的图谱(小片段DNA有序降解)。梯状的图谱和sub-G1峰，相应印证凋亡细胞的存在。

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