背景噪音与电压的关系

wsnxbdr · 发表于 2013-7-20 23:07:24

本帖最后由 wsnxbdr 于 2013-7-20 23:15 编辑

大肠杆菌的syto9染色。设成四个不同浓度梯度。通过FL1-FL3L图中设门得到大肠杆菌的数量，该数量与浓度梯度是成正比的，没什么问题。但是，背景噪音的数据点确是成反比，即菌液越稀，背景噪音点反而越多。这里所谓的背景噪音点指的是FL1值在10以下的点，大肠杆菌是在100-1000间。同时，总点数（即背景噪音点和细菌的点相加），在几个浓度下区别不大。
用下面的直方图来看，分别是最高和最低浓度的，也就是细菌的点变少后，靠近y轴的背景噪音就明显变多了。

然后我降低了电压和增益值。发现背景噪音点和菌液浓度变成了正比关系。
我想问，之前的情况正常吗（细菌的点确实是成正比的）？我觉得背景噪音应该是和细菌的浓度没有关系的吧，但我调小电压后，背景点能够与细菌浓度成正比，是不是因为之前的电压太高导致的。谢谢！

对于前面的奇怪情况，我想到的一种解释是，一个细菌的大峰，会覆盖很多背景的小峰，所以细菌浓度低时，被覆盖的少了，背景的峰就变多了，只不过这种解释在我调低电压后又说不通了。

这个问题其实不影响我得到想要的结果，就是不清楚噪音点是如何来的，其数量有没有规律，是不是噪音点应该少于一定数量数据才可信。

niwanmao · 发表于 2013-7-21 13:22:30

如果你已知道大肠杆菌的位置，那么可以通过设置阈值排除这些背景信号。

你所谓的噪音，我个人推测有以下几种可能：1、细菌破碎后的碎片；2、管路的脏东西；3、电子信号噪音。无论如何，由于这些信号的荧光很弱，所以可以通过增大阈值来排除掉，以保证你能够获取到足够量的大肠杆菌。

wsnxbdr · 发表于 2013-7-21 13:27:37

niwanmao 发表于 2013-7-21 13:22

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如果你已知道大肠杆菌的位置，那么可以通过设置阈值排除这些背景信号。

你所谓的噪音，我个人推测有以下几 ...

那电子信号噪音，应该电压越高就越多吧，一般来讲，是不是应该在不影响结果检出的情况下，使电子噪音越少越好。
我看仪器中前人的方法有的电压设的比较低，基本没有噪音和背景，最后的结果，他们都没有设门，直接用的总数，这样做我觉得不太合理。

niwanmao · 发表于 2013-7-21 16:47:23

wsnxbdr 发表于 2013-7-21 13:27

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那电子信号噪音，应该电压越高就越多吧，一般来讲，是不是应该在不影响结果检出的情况下，使电子噪音越少 ...

随着电压增高而增多的多是碎片或液路中脏东西的信号。可以通过设阈值排除。

didi_zhou · 发表于 2013-7-31 12:51:08

wsnxbdr 发表于 2013-7-21 13:27

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那电子信号噪音，应该电压越高就越多吧，一般来讲，是不是应该在不影响结果检出的情况下，使电子噪音越少 ...

应该是杂质，噪音不会这么大，加上有这么明显的峰。你的杂质在你的稀释液或鞘液里面是恒定的，越稀的话杂质相对于细菌就对多，杂质峰越大，菌的风越小，这个很正常。你可以尝试使用更干净的鞘液或稀释液。或者直接用其他方式排除，比如FS LOG/SS LOG把你的细菌圈出来就好。

boiledtea · 发表于 2013-8-1 21:45:32

我的推测是，背景噪音就是电噪，形成的原因就如你讲的，电压和增益太高了。你给出的两个图很有趣，在检测样本时，电子系统一定的采样频率下，有样本通过检测器就会形成一个较强的信号（也就是你的大肠杆菌），如果没有样本通过或者通过的是很小的杂质，但如果你设定的电压和增益太大，就会检测到一个背景信号或杂质信号。所以在一定的采样频率下你的样本浓度越高，形成背噪的几率就越小了。你可以做一个测试，在这个条件下上一管PBS，看是不是都是背噪，在相同的检测时间内，events数是不是也差不多。
另外，这个背噪虽然难看，并不影响你的结果，但最好还是把电压调低一点或者阈值设高一些。。

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