求助关于同型对照的问题

luxj807 · 发表于 2013-8-13 11:31:06

本帖最后由 luxj807 于 2013-8-13 11:32 编辑

检测的是细胞株
在CD34+中，将同型对照的细胞设在横坐标道数10^0至10^1之间，上测试管的时候表达阴性的细胞团跑到10^1至10^2之间(粗红色箭头所示)，这是什么原因呢？
在CD133+中，同型对照管的阳性区域的细胞比测试管阳性区域的细胞还多，有没有同志们做出这样类似的结果？会不会存在Fc的非特异性结合？对照细胞的横坐标荧光强度比测试细胞的荧光强度还要大，经常出现在FL-2通道，是否合理？
望不吝赐教,谢谢! QQ截图20130811110754.jpg

luxj807 · 发表于 2013-8-13 11:32:14

PS:检测的是细胞株,不是外周血

didi_zhou · 发表于 2013-8-13 15:11:48

有时候会飘的，跟试剂的质量有关，以及你选择的抗体及同型对照是不是一个公司等等。但是划门的时候最好还是根据分群来画，你的细胞分群都还算比较明显的，所以门不用根据同型有时候会飘的，跟试剂的质量有关，以及你选择的抗体及同型对照是不是一个公司等等。但是划门的时候最好还是根据分群来画，你的细胞分群都还算比较明显的，所以门不用根据同型来，根据分群就好。来，根据分群就好。

niwanmao · 发表于 2013-8-13 21:56:14

这两个问题其实都跟同型对照的选择有关。同型对照的选择除了要选择其重链类型相同(IgA, IgG, IgD, IgE, or IgM)、荧光素相同之外，还要轻链类型也要相同（kappa、lambda）。
象您说的这两种情况平时都碰到过，一种是同型比检测标本高，一种是同型比检测标本低。原因可能是同型选择不正确，也可能是背景的干扰。
我看你应该是多色流式实验，你可以尝试一下使用FMO对照。

参考资料：
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2647-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2376-1-1.html

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