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如何检测全血中的lambda和kappa轻链

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发表于 2010-8-1 19:17:31 | 显示全部楼层 |阅读模式

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标题:如何检测全血中的lambda和kappa轻链

在白血病和淋巴瘤免疫分型中,我们经常会碰到检测lambda和kappa轻链的问题,跟IgM检测一样,这类免疫球蛋白的检测会受到血浆中免疫球蛋白的影响,因此在检测前需要尽可能减少血浆中免疫球蛋白的干扰。

下面推荐一个检测步骤:

  1. 收集外周血标本,抗凝剂可选择EDTA、肝素或枸橼酸钠
  2. 取2–3 ml 全血至25 ml的普通容器。然后加入20–25 ml  PBS/BSA (含磷酸盐缓冲液 pH 7.4 和1\% BSA,预热至37度),充分混匀。
  3. 400 g 离心 5 分钟。小心的移除上清,注意不要扰动细胞团块。用残余的液体重悬细胞团块。
  4. 重复步骤2、3两次。
  5. 取100 μl洗涤过的全血至上样管,加入适量抗体(参照说明书),充分混匀,室温孵育30分钟。
  6. 加入适量的红细胞裂解液,室温裂解10分钟。400 g 离心 5 分钟,去上清。
  7. 用2 ml  PBS/BSA洗涤细胞,400 g 离心5分钟,去上清。
  8. 用0.2 ml PBS/BSA 重悬细胞,如有需要,加入0.2 ml  0.5\% 多聚甲醛。
  9. 上机,获取数据。

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发表于 2012-10-31 18:40:27 | 显示全部楼层
版主,您好,请问检测全血中的lambda和kappa轻链对红细胞裂解液有要求吗?一个患者外周血淋巴细胞比例很高,CD19+占80%多,我做轻链检测,使用市场上的红细胞溶解液做不出来结果,于是我就先洗涤全血,再标记抗体再次试做,那群CD19强阳性的细胞找不到了,细胞很散,不知道是什么原因?这个跟电压有关系吗?我做过很多外周血标本,基本上电压都还可以的,谢谢!
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 楼主| 发表于 2012-10-31 22:15:20 | 显示全部楼层

轻链检测对红细胞裂解液没有要求。

上面这个帖子是我在几年前从别的地方摘录翻译过来的,我们平时的步骤就是标本用PBS洗涤3次以上(至少3次),每次洗涤完毕都尽可能吸干净上清,最后加入PBS重悬,抗体孵育的步骤与其它胞膜抗体一样。

获取时,BD的LAMBDA、KAPPA往往会比普通胞膜抗体荧光偏高,但不需要去调节。前段时间试用了一份DAKO的LAMBDA/KAPPA的KIT,发现确实比BD的要好,主要表现在阴性细胞的位置偏移、阳性与阴性的分群等指标上。这个实话实说。至于LAMBDA、KAPPA的表达如何分析,可参见:http://www.flowcyto.cn/bbs/reade ... Jl9n03PX7wJXrBGWbsk  的第3页中间这张幻幻灯(可以放大查看)。
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发表于 2012-11-1 21:53:34 | 显示全部楼层
真心谢谢您,版主,参照您的建议,我再重复试验吧,祝自己顺利。。。。
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发表于 2013-5-9 10:36:06 | 显示全部楼层
PBS预热的目的是什么呢?
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 楼主| 发表于 2013-5-9 11:45:44 | 显示全部楼层
sdjjcw 发表于 2013-5-9 10:36
PBS预热的目的是什么呢?

protocol翻译自:http://www.assay-protocol.com/cell-biology/sample-preparation
我们平时不预热也没问题。
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