求助：磁珠分选Treg上流式后均显示较多细胞碎片（附图）

niwanmao

lvhong0920 发表于 2013-9-16 19:16

                               
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我是取得200ul上流式的，200ul大约10000多细胞吧。是不是应该多取一些标本

200ul一般高速的话获取1分钟左右就没了。你就算计算好了200ul刚好10000个细胞，你获取的时候肯定获取不到10000个，因为信号会丢失，而且最后一点点会吸不进去。

所以，你要么多加点标本，要么在标本吸光之前停掉，别管它获取到了几个细胞。

niwanmao

lvhong0920 发表于 2013-9-16 19:18

                               
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没达到10000前，CD25的纯度也不高，一直都没有达到90%

没达到10000个之前你怎么看到纯度，看那个实时显示的数字？那时候还在获取状态，结果不准确，需要等到停止后软件才会统计整体的。你先按照上面说的做再说吧。只要你按照上面说的做，你这些问题都会解决。

lvhong0920

niwanmao 发表于 2013-9-16 19:20

                               
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没达到10000个之前你怎么看到纯度，看那个实时显示的数字？那时候还在获取状态，结果不准确，需要等到停 ...

是看的当时显示的数据。之前那个同学也取的200ul,可能我的细胞量少吧。那我下次取300ul应该够了吧（因为剩下的我还要提取RNA用）。

lvhong0920

niwanmao 发表于 2013-9-16 19:20

                               
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没达到10000个之前你怎么看到纯度，看那个实时显示的数字？那时候还在获取状态，结果不准确，需要等到停 ...

倪老师：怎么判断停下来的时间呢？是跑到10000之前就停吗？初学者请见谅

niwanmao

lvhong0920 发表于 2013-9-16 19:38

                               
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倪老师：怎么判断停下来的时间呢？是跑到10000之前就停吗？初学者请见谅

停止获取的时间不是用来判断的，而是设置的。流式细胞仪可以设置获取的时间，也可以直接设置获取的数量。

我之前的意思是让你盯着上样管，当标本没有了就停，别管数量多少，也别管时间多少。如此即可。

lvhong0920

niwanmao 发表于 2013-9-16 19:58

                               
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停止获取的时间不是用来判断的，而是设置的。流式细胞仪可以设置获取的时间，也可以直接设置获取的数量。 ...

好的，倪老师，非常感谢，希望赶紧找出原因，赶着做实验毕业。

liliqianyi

你好，我最近也在做美天旎磁珠分选treg，可是分选的纯度很不稳定。向您请教一下：
你用的也是regulatory T cell isolation kit吗？
还有，你是用的是MIDI MACS 或Mini MACS分选器  还是auto MACS？
希望和你多多交流请教！！