用Calcium Green和Fura Red检测钙离子流动

malizewski

倪老师，做Fluo4和Fura red检测细胞内钙离子，Fura red单染阳性率比较低，Fura red和钙离子结合后荧光信号会下降，是这个原因吗？还是因为染色操作的原因导致单染管阳性率低呢？

niwanmao

malizewski 发表于 2019-6-29 08:28
倪老师，做Fluo4和Fura red检测细胞内钙离子，Fura red单染阳性率比较低，Fura red和钙离子结合后荧光信号 ...

对的。
你可以采用紫光激发的FuraRed信号除以绿光激发的Fura Red信号，这个比例可以代表钙离子水平（参考文献：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4383592/）
如果你这里双染，也可以用增高的Fluor 4荧光强度除以降低的Fura Red荧光强度。

malizewski

倪老师，做外周血NK细胞胞内钙离子检测，也用的Fura red 和Fluo 4两种染料，需要把NK分选出来再染色吗？我直接分PBMC，染钙结合染料，然后加CD56和CD3抗体，直接测NK细胞胞内钙，这样可以吗？

风轻扬

niwanmao 发表于 2019-6-29 13:47
对的。
你可以采用紫光激发的FuraRed信号除以绿光激发的Fura Red信号，这个比例可以代表钙离子水平（参考 ...

倪老师，我想收集人新鲜组织样本消化后，流式检测细胞基础钙离子水平，探索疾病条件下细胞内钙的变化。受样本来源所限，不可能一天检测完，需要连续测试两个月。之前用Fluo-4染同一个细胞系在同一天不同时间、不同的日期多次测钙，可能受环境温度、操作手法误差等多种因素影响，结果挺离散的，感觉不太可信。如果采用Fluo-4/Fura-red双染，488激发，FITC(530)/PerCP(675) 双通道检测，计算Fluo-4/Fura-red比率，是不是比较可行？最近见Nature Communications上有文章用共聚焦做了比率测钙，但不知道是不是同一天测试的。https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7584603/

比率测钙

niwanmao

malizewski 发表于 2019-10-13 16:57
倪老师，做外周血NK细胞胞内钙离子检测，也用的Fura red 和Fluo 4两种染料，需要把NK分选出来再染色吗？我 ...

我个人觉得最好是分选出来再做，不过你也可以试试吧，这个方式我没做过。