ebioscience的胞内因子刺激剂效果

liliqianyi

各位，有人有的ebioscience的胞内因子刺激剂试剂盒吗？就是Cell Stimulation Cocktail (plus protein transport inhibitors) (500X)
最近在做小鼠和人的胞内因子ifn-r、il-4、il-17的检测（正常小鼠和人的标本），用的这个Cell Stimulation Cocktail，试了两次，效果都不好，小鼠的那个检测不到胞内因子的表达，人的连表面抗原都检测不到，培养过程中内吞还是怎样。


这个试剂盒，是刺激剂和阻断剂的混合物，成分PMA(40.5 uM), Ionomycin (670 uM), Brefeldin A (5.3 mM), Monensin (1 mM) in Ethanol (500X) .
加入后刺激6h。

看倪老师和大家的帖子，刺激剂的浓度不太一样。但我这个也没办法调整各个成分的浓度。

有人用过这个试剂盒还不错吗？我是得换个各个组分分开的吗？

PS：操作过程应该没什么问题，但是由于流式上机时间限制的问题。我用的是刺激后，先表面染色，然后固定过夜，第二天再然胞内，上机。
希望大家多多指导！！！

niwanmao

你说的是什么表面标记都检测不到？CD3、CD4、CD8？如果是这样的话，可能是染色有问题。

检测是否活化和破膜成功，可以用CD69看看：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2929-1-1.html

liliqianyi

niwanmao 发表于 2014-1-9 13:24
你说的是什么表面标记都检测不到？CD3、CD4、CD8？如果是这样的话，可能是染色有问题。

检测是否活化和破 ...

倪老师，看到您的回复了谢谢！表面抗原老鼠的CD4还好，人的用CD3，CD8反设效果也不太好。但也可能是人的标本采集有点问题。

嗯，我做的可能太草率了，一直没有用CD69检测。再查查相关文献，订这个抗体。
另外就是，细胞刺激的过程中，发现，只加PMA的细胞增殖活化的比较好，加了BFA的细胞葡萄杨样的明显少。我的理解，BFA只是组织胞内因子外排，对细胞的增殖刺激有影响吗，除了它本身的毒性对细胞活性不好这个原因。

还有就是，退而求其次的方法是先染表面，再用固定液过夜，第二天再染胞内。过夜所说的是固定液对吧，因为看到有位老师写的固定通透液过夜。
问的很乱，麻烦老师有空时帮忙解答吧

niwanmao

liliqianyi 发表于 2014-1-9 23:25
倪老师，看到您的回复了谢谢！表面抗原老鼠的CD4还好，人的用CD3，CD8反设效果也不太好。但也可能是人的 ...

我想你应该看过@sugarswallow 站友的试验：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... id=859&pid=1759，可以采用先染表面，再用胞内因子的固定液成份过夜。这是可行的。

liliqianyi

niwanmao 发表于 2014-1-10 17:39
我想你应该看过@sugarswallow 站友的试验：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=redirect&goto=fin ...

恩，好的，谢谢！上次就是这样做的，结果还没出来，到时看看怎样。