C6流式结果

dsp187

PI和AV-FITC单染的均未做诱导，直接未处理细胞染色。用的是凯基双染凋亡试剂盒。发现处理组正常细胞和凋亡早期细胞不是两个细胞团，我这个确实是能诱导晚期凋亡的，但延长时间仍看不到晚期凋亡，图和上传的处理组图片是差不多的。是C6的问题还是样品处理不行。最重要的是为什么只有一个细胞团？？？

niwanmao

似乎以前也有人问过类似问题，感觉更像是染色的问题，可能是试剂，也可能是染色步骤的问题。机器不会有问题的。

dsp187

niwanmao 发表于 2014-1-17 23:02
似乎以前也有人问过类似问题，感觉更像是染色的问题，可能是试剂，也可能是染色步骤的问题。机器不会有问题 ...

我用的是凯基的试剂盒，binding buffer 用了200，PI和AV按2μl加的。静置15分钟后过滤，上机检测，从染色到收集细胞大约有半小时吧。单染的细胞没有处理，为正常细胞单染，会不会有问题，是否要处理成阳性再染？

niwanmao

dsp187 发表于 2014-01-18 09:53:29

                               
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我用的是凯基的试剂盒，binding buffer 用了200，PI和AV按2μl加的。静置15分钟后过滤，上机检测，从染色

单染最好用阳性细胞，不过你上面应该有双染的阳性标本吧，阳性标本分群这样还是不好

dsp187

niwanmao 发表于 2014-1-18 12:20
单染最好用阳性细胞，不过你上面应该有双染的阳性标本吧，阳性标本分群这样还是不好 ...

谢谢倪老师的回复。我单染和双染的细胞都是阴性的、未做任何处理的细胞。处理组就刺激完了到时间点收集双染。新手一个，不太懂

niwanmao

dsp187 发表于 2014-1-18 14:10
谢谢倪老师的回复。我单染和双染的细胞都是阴性的、未做任何处理的细胞。处理组就刺激完了到时间点收集双 ...

不过仔细看，觉得也不能说没染上，或许可能是因为你的标本没有诱导出凋亡的缘故。你看我的设门：

dsp187

niwanmao 发表于 2014-1-18 14:52
不过仔细看，觉得也不能说没染上，或许可能是因为你的标本没有诱导出凋亡的缘故。你看我的设门：

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谢谢倪老师指导。我们实验室还有做凋亡的，他的刺激很强，24h会有很多死细胞，做出来的流式结果和我这个类似，只有左下方一个细胞团，处理组仅仅是细胞团右移了一些，双阳性的基本没有。而他的这个刺激已经有文章证明是双阳性为主的了。搞不明白为啥就一个细胞团

niwanmao

dsp187 发表于 2014-1-18 20:31
谢谢倪老师指导。我们实验室还有做凋亡的，他的刺激很强，24h会有很多死细胞，做出来的流式结果和我这个 ...

看看其它人有没有用别的牌子的试剂盒，比如BD的AV-PI试剂盒，BD的我上次做过分群挺不错。

dsp187

niwanmao 发表于 2014-1-18 21:03
看看其它人有没有用别的牌子的试剂盒，比如BD的AV-PI试剂盒，BD的我上次做过分群挺不错。 ...

谢谢倪老师，我再看看吧