一抗为多抗时同型对照选择

vtea

       请问大家，我最近做某稳转细胞系胞内染色的间标流式，所用一抗P是公司订做的IgG多抗（兔抗人），那么同型对照怎么选择呢？可不可以买一个rabbit anti- human IgG(H+L)抗体当做同型对照？
       但实际上我检测的celline一个是A 蛋白过表达，另一个是空载对照，这样的情况是不是不用同型对照也可以呢？直接用没有染色的细胞做阴性对照，最后只要比较两个细胞系P分子，可以吗？
      希望大家给宝贵的建议，谢谢！

niwanmao

你就做一个标记吗？如果是的话，可以用空载对照代替同型对照。

vtea

niwanmao 发表于 2014-3-9 18:18
你就做一个标记吗？如果是的话，可以用空载对照代替同型对照。

谢谢倪老师！这些细胞是要刺激以后再染一抗的，刺激后空载细胞系P分子表达也会上调，可否以未刺激的空载细胞为同型对照？

niwanmao

vtea 发表于 2014-3-9 18:45
谢谢倪老师！这些细胞是要刺激以后再染一抗的，刺激后空载细胞系P分子表达也会上调，可否以未刺激的空载 ...

我是这么认为的，如果过表达细胞是经过刺激的，那么空载也应该刺激，否则他们的处理因素不同，不足以作为对照。

vtea

niwanmao 发表于 2014-3-9 18:59
我是这么认为的，如果过表达细胞是经过刺激的，那么空载也应该刺激，否则他们的处理因素不同，不足以作为 ...

我想这样设计实验：#1未刺激未染色组（空载+过表达），#2未刺激染色组（空载+过表达），#3刺激染色组（空载+过表达），以#1为基本control，#2空载为“同型”，您看如何？

niwanmao

vtea 发表于 2014-3-9 20:26
我想这样设计实验：#1未刺激未染色组（空载+过表达），#2未刺激染色组（空载+过表达），#3刺激染色组（空 ...

我不明白，为什么要设＃1，如果你空载肯定不表达A蛋白，那么就＃2、＃3均用空载做对照即可。

vtea

niwanmao 发表于 2014-3-9 20:32
我不明白，为什么要设＃1，如果你空载肯定不表达A蛋白，那么就＃2、＃3均用空载做对照即可。 ...

因为空载还是有一定程度表达（只是比较水平较低），所以觉得加上#1比较好一点。

niwanmao

vtea 发表于 2014-3-9 20:37
因为空载还是有一定程度表达（只是比较水平较低），所以觉得加上#1比较好一点。 ...

如果空载也有一定程度表达，那＃1只能算空白对照，没法用来设门，只能用来调节电压。
那还是需要同型的，不过实在没法找到相应的同型，只能暂时用空白对照，但很麻烦。

vtea

niwanmao 发表于 2014-3-9 20:54
如果空载也有一定程度表达，那＃1只能算空白对照，没法用来设门，只能用来调节电压。
那还是需要同型的， ...

您说的没错，#1就是用来调电压的，多抗，实在不知道买什么作为同型对照好啊

niwanmao

vtea 发表于 2014-3-9 21:49
您说的没错，#1就是用来调电压的，多抗，实在不知道买什么作为同型对照好啊 ...

Abcam公司有这么一个页面供您参考：Isotype controls for polyclonals
Most isotype controls are monoclonal. They are not suitable for use with polyclonal antibodies as these contain more than one IgG subclass. However, we do provide several polyclonal isotype controls for use in these circumstances.（不过他们似乎也提供少数几个，你可以问问abcam的代理商看看，其它公司应该也会有）


http://www.abcam.com/index.html? ... rce&rid=11714#2