关于分析流式细胞周期的问题

栗子

做细胞周期 。用HepG2细胞，转染microRNA，用无EDTA胰酶消化，终止消化后，冷PBS洗2次，70%预冷酒精固定，PI染色40min。用modfit 分析细胞周期，AUTO和手动分析相差很远，而且有的结果分析不出来，求助如何能正确的分析细胞周期。

niwanmao

帮你分析了前2个和最后一个数据（见下），觉得做的还不错。Auto分析多数情况下是不建议使用的，首先你的G2/G1的linearity不是2，其次你的峰分布不是标准的G0/G1为主。手动分析为准，设置见下面图片中的数字，并可自己根据需求调整，使RCS尽可能小，但拟合结果又能反映真实结果。

第一个



第2个


第3个

栗子

niwanmao 发表于 2014-4-12 09:23
帮你分析了前2个和最后一个数据（见下），觉得做的还不错。Auto分析多数情况下是不建议使用的，首先你的G2/ ...

谢谢倪老师，但是我自己手动分析的时候  有时候不出G1 和G2 峰，请问是什么情况啊？

niwanmao

栗子 发表于 2014-4-14 16:27
谢谢倪老师，但是我自己手动分析的时候  有时候不出G1 和G2 峰，请问是什么情况啊？ ...

不会没有峰，只是可能不明显，这往往是由于细胞状态问题造成的。
只要你染色前的细胞密度、PI染液量都一致，通常G0/G1和G2/M的位置变化不大，此时可以利用峰明显的标本设好位置。