多色流式补偿非做不可吗？

月下听蝉

平常做多色实验的时候，在选荧光时，尽可能选择不同激光激发，发射波长也尽可能不相干扰的荧光。圈门时候，圈好些流式效果跟调了补偿的并没有太大差别。（比如四色需要，选择四种激光激发的四种不同荧光）
此外，在细胞不足，需要多色的情况下，远不够做各个荧光的单管染色，身边也没有相应的荧光微球。
但好像高分文章要求的流式图，都需要做好补偿。
多色单细胞分选的时候，补偿是否也要做得很精细？
很无奈。不知道各位站友是怎么看的。

niwanmao

普通的流式细胞术补偿是必须的，这是无可争议的。除非你用那种mass cytometry。

至于分选的时候，如果对于分群不清的，补偿做到位还是非常必要的，当然，如果你分选的对象是象CD4、CD8这种分群很开的，不做也无所谓。

但是分析，补偿必须做到位，否则你的结果就是无效。

RIVA

niwanmao 发表于 2014-8-8 20:55
普通的流式细胞术补偿是必须的，这是无可争议的。除非你用那种mass cytometry。

至于分选的时候，如果对于 ...

如果细胞不够用，还要做多色的话，可以用BD的compbeads调节补偿，最近新发现，用着还不错哦，还有一种叫SPHEROTECH的品牌，也有一种调节补偿的微球~

wolfrog

补偿主要看荧光之间有没有溢漏,如果有遗漏就必须做补偿。我只有用三种不同激光的荧光APC, PE, Percific Blue的时候不做补偿。

flyer625

贝克曼的流式细胞仪可以使用BD的补偿微球吗？

niwanmao

flyer625 发表于 2014-8-12 16:49
贝克曼的流式细胞仪可以使用BD的补偿微球吗？

补偿微球通用的，补偿微球说白了，它就是一种没有荧光的捕获颗粒，代替我们的细胞来结合我们要使用的抗体。