原代细胞背景太高

cellprobe

有个疑问。我用三种针对同一抗原的抗体检测老鼠接种瘤细胞中P基因的表达。IgG是同型对照，三种抗体是166202,10007,02483；然后IgG和抗体都用PE标记的二抗染色。上级之前样品都用7AAD染色。PE在FL2，7AAD在FL3.

我的这个实验重复很多次，每次都发现背景太高，这次我把我认为是我要的细胞圈出来，见下图。我认为其余的都是死细胞或者非特异性染色。原始数据也上传了。请指教！谢谢

niwanmao

FL2电压似乎太高了吧。

另外，FL2/FL3之间的补偿值如何？

cellprobe

niwanmao 发表于 2014-11-25 21:14
FL2电压似乎太高了吧。

另外，FL2/FL3之间的补偿值如何？

大概是百分子二十几。

niwanmao

cellprobe 发表于 2014-11-25 22:04
大概是百分子二十几。

你试试把FL3的电压先降下来，看看是不是补偿会有所改观

cellprobe

niwanmao 发表于 2014-11-25 21:14
FL2电压似乎太高了吧。

另外，FL2/FL3之间的补偿值如何？

FL2覆盖的范围很长，我觉得这个和电压高没有直接关系，可能是非特异性染色太强了

cellprobe

niwanmao 发表于 2014-11-25 22:06
你试试把FL3的电压先降下来，看看是不是补偿会有所改观

我可以试试，我怕FL3降下来以后，FL2的覆盖范围还是很宽。

niwanmao

cellprobe 发表于 2014-11-25 22:10
FL2覆盖的范围很长，我觉得这个和电压高没有直接关系，可能是非特异性染色太强了 ...

FL2这种表现，其实就是提示抗体没有滴定好。

cellprobe

niwanmao 发表于 2014-11-25 22:17
FL2这种表现，其实就是提示抗体没有滴定好。

可能吧，这个抗体浓度在细胞系上做结果不错。可是把细胞系注射动物再分离出来做FACS，结果就是这样了。