小鼠骨髓中浆细胞不分群的问题

xiaoxicindy

各位老师，第一次提问，不好意思哈，问的可能比较基础，不好意思哈~
我做的是小鼠（dba1）骨髓流式，主要观察目前出现的问题：
1.t细胞、单核细胞、浆细胞均不分群，我想问别的流式会不会有这种问题出现？不分群的原因有哪些？
2.有的人说浆细胞不分群是我选的marker不对，细胞圈群不对，我选的是CD138作为浆细胞标记，细胞圈的是粒细胞群，对不对？
3.cd138明显飘到右侧了，我想问出现这种细胞群整体漂移的原因有哪些呢？

niwanmao

xiaoxicindy 发表于 2015-1-7 11:05
我试着操作了一下，自己觉得调出来的结果怪怪的，感觉不对，还是不分群呀~
我把原始数据上传了一下，老师 ...

看了下，CD138应该是没有表达。
可能性有两个：
1、和正常人一样，正常小鼠本身浆细胞就非常低，故少量细胞看不出来。
2、抗体质量问题。

niwanmao

1、你指的是FSC/SSC散点图不分群吗？一般T细胞和单核细胞会分开的，但浆细胞在fsc/ssc上可能混在其中难以分开。
2、人类浆细胞是CD138最特异，但小鼠是否一样不太清楚，感觉应该差不多，建议你参考一下相关文献。
3、你指的是CD138坐标轴上，群体的分布缩窄了，右界限其实差不多的。这种一般与标本有关。

xiaoxicindy

niwanmao 发表于 2015-1-6 19:22
1、你指的是FSC/SSC散点图不分群吗？一般T细胞和单核细胞会分开的，但浆细胞在fsc/ssc上可能混在其中难以分 ...

谢谢老师的解答
我是想问那张fsc-ssc图，浆细胞圈的群是粒系，这样对吗？还是应该圈其他群？因为我看学校老师是这样圈的，我问了一次，他说主要表达在粒系群里，但是这样做出来的图（分析数据时画门的图）并未分群，只是一坨细胞被十字门切开，我想问这样的图正常吗？
我查了资料，小鼠的浆细胞marker也是CD138，但是有的人说只用cd138一个marker不行？但是我不知道还要再添什么marker才能标记浆细胞？科里一个博士曾经用CD19-CD138+标记的小鼠脾脏当中的浆细胞，是分群的，为什么骨髓当中不分群呢？
谢谢老师~~

niwanmao

xiaoxicindy 发表于 2015-1-6 21:56
谢谢老师的解答
我是想问那张fsc-ssc图，浆细胞圈的群是粒系，这样对吗？还是应该圈其他群？因为我看学校 ...

至少在人类标本中，正常浆细胞的SSC不会这么大，大概与单核细胞类似，圈粒系区域肯定不够，而应该根据CD138来圈。

CD138从整体来说尽管并非浆细胞特异性表达，因为有些淋巴结生发中心后B细胞也会表达，有些上皮细胞会表达，但是在骨髓中，我认为可以肯定是浆细胞。所以一个足够。

至于CD19-CD138+的表型，在人类标本中，属于异常浆细胞，而非正常。小鼠我认为也是一样。
对于不分群的原因，我怀疑还是染色或者抗体浓度问题，你把这两个问题分别确定一下，前者注意染色条件（缓冲液、时间等），后者注意抗体用量，做个浓度梯度找个最佳抗体用量。

xiaoxicindy

niwanmao 发表于 2015-1-7 08:34
至少在人类标本中，正常浆细胞的SSC不会这么大，大概与单核细胞类似，圈粒系区域肯定不够，而应该根据CD13 ...

我试着操作了一下，自己觉得调出来的结果怪怪的，感觉不对，还是不分群呀~
我把原始数据上传了一下，老师能否师范一下到底怎么通过CD138圈细胞设门？
荧光标记是：cd4 B220 CD14都是fitc，RANKL是pe，cd138是percp-cy5.5,谢谢老师啦