人结肠（癌）组织单细胞悬液制备

爱白衣杀手

有没有人结肠（癌）组织单细胞悬液制备的protocol，胶原酶都有用的II,IV,VIII都有用的有没有什么区别？最合适的是哪一种？还有其他胶原酶可以用吗？

niwanmao

可以用机械法，参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1569-1-1.html

爱白衣杀手

@niwanmao 倪老师，我们有美天旎的tissue dissociator。就是条件还没摸。根据说明书试了一次效果不好。

niwanmao

爱白衣杀手 发表于 2015-1-15 11:15
@niwanmao 倪老师，我们有美天旎的tissue dissociator。就是条件还没摸。根据说明书试了一次效果不好。 ...

效果不好是指磨不碎还是细胞碎过头了？

爱白衣杀手

niwanmao 发表于 2015-1-15 11:10
可以用机械法，参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1569-1-1.html

这个protocol什么酶都没用啊。能分离出结肠固有层的淋巴细胞吗？感觉很悬

niwanmao

爱白衣杀手 发表于 2015-1-15 11:26
这个protocol什么酶都没用啊。能分离出结肠固有层的淋巴细胞吗？感觉很悬

所以叫机械法。我们平时做淋巴组织、粘膜组织就是用机械法，不过用的是medimachine，跟美天旎那个机器类似的。

爱白衣杀手

niwanmao 发表于 2015-1-15 11:20
效果不好是指磨不碎还是细胞碎过头了？

碎倒是挺碎，就是太黏稠，过滤不了，而且过滤后的东西又会粘到一起，不知道有没有什么好方法。多加些DNA酶吗？还是用纱布过滤？或是加些其他东西。这个机械法看着倒是挺省钱的，就是不知道效果如何，有没有什么注意点或经验之类地的？实验室之前没人做过从头摸个技术很费神。

niwanmao

爱白衣杀手 发表于 2015-1-15 16:22
碎倒是挺碎，就是太黏稠，过滤不了，而且过滤后的东西又会粘到一起，不知道有没有什么好方法。多加些DNA酶 ...

我们平时磨粘膜组织、淋巴结没发觉粘稠，是不是你的组织标本放置时间太长了或者保存不当？

爱白衣杀手

niwanmao 发表于 2015-1-15 17:20
我们平时磨粘膜组织、淋巴结没发觉粘稠，是不是你的组织标本放置时间太长了或者保存不当？ ...

是新鲜的组织。问了别人说可能是细胞磨碎了后释放出DNA引起的，所以要加DNA酶。

niwanmao

爱白衣杀手 发表于 2015-1-15 22:03
是新鲜的组织。问了别人说可能是细胞磨碎了后释放出DNA引起的，所以要加DNA酶。 ...

可以试试：）