细胞透膜处理后，细胞FSC和SSC发生变化

dcl60066

如图，我的细胞系经过透膜处理和不处理的流式图，横坐标为FSC，纵坐标为SSC，请问为什么差别这么大呢？每次做完透完膜后都是这样，请问大家都是这样还是我处理得不好呢？谢谢

niwanmao

dcl60066 发表于 2015-1-26 13:23
谢谢解答，但是我的细胞是细胞系，处理后形态差别太大，如果用皂角素的话，是否不会有这个变化呢。我用的 ...

你是要知道原理吗？只要是破膜就会引起细胞形态变化，不论用何种成份的，因为固定和破膜都会影响细胞膜的分子，进而影响其结构。
不过你可以选择略为温和的破膜剂倒是真的，皂素是一种，另外那些商业化的破膜剂也是可以尝试（invitrogen的Fix&Perm或beckman的Perfix-nc）

niwanmao

前段时间我发的一篇帖子你可以没有看到：）
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4134-1-1.html

dcl60066

谢谢解答，但是我还是不明白为什么破膜后出现细胞形态不一样的情况，您能说得再具体一点吗，关于破膜引起的变化。谢谢

以梦为x马

破膜剂种类及对细胞形态的影响
①0.05%皂角素  ②0.1%曲拉通（Triton X-100） ③70%乙醇
用皂角素破膜，淋巴细胞、单核细胞、粒细胞3群细胞清晰可见，其相对百分比与未处理的血细胞相似；而用Triton X-100和乙醇处理时淋巴细胞和单核细胞很难分开，尤其用乙醇处理时淋巴和单核完全混在一起。用Triton X-100和乙醇处理时CD8细胞显著下降。用Triton X-100处理时，IFN-γ显著下降。

dcl60066

以梦为x马 发表于 2015-1-25 08:52
破膜剂种类及对细胞形态的影响
①0.05%皂角素  ②0.1%曲拉通（Triton X-100） ③70%乙醇
用皂角素破膜，淋 ...

谢谢解答，但是我的细胞是细胞系，处理后形态差别太大，如果用皂角素的话，是否不会有这个变化呢。我用的是ebioscience的破膜剂

以梦为x马

这个我也没做过，那一段我是参考《临床流式细胞分析》王建中 2005年版本的。

kobe327292007

这个就需要你连control也用破膜剂也处理了，这样所有样品的形态就一致了。