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简要介绍:
哺乳动物细胞周期分析是流式细胞术在20世纪60年代开始应用于研究的,属于最早的应用之一。检测细胞周期相对来说比较简单,只要用染料标记细胞DNA,然后检测其荧光强度即可。但是在其中还是需要考虑很多细节:
- 如何使染料进入细胞?
- 需要固定或破膜吗?
- 需要染活细胞的DNA以便我们根据周期分选吗?
- 目前有许多DNA结合染料可用,我应该选择哪种染料?
- 如何设置流式细胞仪,以便能够正确测量单个细胞的DNA?
- 如何分析DNA直方图?手工分析还是自动分析?
- 单参数DNA周期分析的优点和缺点?
在本视频中,你可以找到这些问题的答案。虽然是英文,但相信结合视频里的PPT,不会很难看懂。
关键幻灯的视频截图(8幅):
1、整个讲座的提纲:我们为什么要分析细胞周期;DNA结合染料有哪些;影响实验成功的因素包括样本和流式细胞仪;跑样本的一些实战技巧
2、细胞周期的应用领域:药物研发;癌症诊断和预后评估;发酵(酵母细胞周期);植物DNA研究;精子分选;细胞周期分选。
3、DNA结合的染料,主要有:碘化丙碇;溴化乙碇;Hoechst染料、青花素染料(如TO-PRO-3、SYTO/SYTOX)、吖啶橙染料、派若宁、苯乙烯基染料(如LDS-751)、光神霉素、7-放线菌素D、DAPI、DRAQ5、DRAQ7等。
4、常见的几种DNA结合的染料可按照激发波长、结合的特异性、是否染活细胞等进行分类。
5、固定或破膜?各有优点
6、导致细胞周期结果异质性的原因不少,有生物学本身的,也有激光器校准方面的、流体学、样本制备、染料方面的,这些内容是视频中的重点,讲得最多,并且附带了一些实例加深印象。
7、跑样本上需要画的几个散点图:
8、分析时需要遵循的设门步骤
视频观看(登录后可见):
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