周期荧光值变化

tianhuahuang

请问各位高手，周期检测中，同样的一批样本，细胞也一样，软件分析每个样本的荧光值会移动，包括G0/G1期，S期，G2/M期。比如说第一个样本G1期荧光均值是30.91，Tube4就变成了41.48，倒数第二管又变成了26.49。
1.这几个样本是经过药物处理的，用的是细胞周期阻滞药物，目的是使周期阻滞在G1期。只是阻滞药物作用的时间不一样。
2.检测过程中，流式细胞仪的电压始终不变。
3.Mdofit软件拟合的也非常好。
既然是周期阻滞药物，只会使细胞周期中各个时期的比例发生改变，不应该改变他们的荧光值，就算改变，也只是稍微的改变，不会变的这么大啊，各位老师怎么看？
见附件。

niwanmao

tianhuahuang 发表于 2015-1-23 00:44
嗯，您的意思是PI和细胞的比例会造成荧光值变化是吧？那假如加的PI量对细胞量而言，都是过饱和的，保证所 ...

过量，首先就是一个不标准的、不正确的操作，你如果看过站内关于抗体滴定的文章，就知道过量并不是好事。在流式实验中，找到一个合适的抗体浓度和正确的细胞量，都是非常有必要的，而不是你想怎么样就怎么样。
PI也一样，按照标准的浓度，并且加上同样量的细胞和体积，对你的实验有好处。不要再多想什么过量了。

niwanmao

一般说来，轻微变化是可以的，因为仪器本身就存在一定的CV值，如果偏移比较明显，请确定以下的量是否一致：
1、加入的PI量
2、细胞数量（固定后，加PI前）
3、细胞悬液体积（固定后，加PI前）

tianhuahuang

niwanmao 发表于 2015-1-22 08:54
一般说来，轻微变化是可以的，因为仪器本身就存在一定的CV值，如果偏移比较明显，请确定以下的量是否一致： ...

倪老师，您的意思就是说PI不够？假设每个样本加入的PI量都是足够的，是否您说的3点可以不考虑？

niwanmao

tianhuahuang 发表于 2015-1-22 11:03
倪老师，您的意思就是说PI不够？假设每个样本加入的PI量都是足够的，是否您说的3点可以不考虑？ ...

不是说不够，而是问你是否都一样？只有保证上面三点都一样的情况下，才能使荧光强度尽可能一致（但不可能完全一样，因为仪器存在CV）

tianhuahuang

niwanmao 发表于 2015-1-22 14:03
不是说不够，而是问你是否都一样？只有保证上面三点都一样的情况下，才能使荧光强度尽可能一致（但不可能 ...

嗯，您的意思是PI和细胞的比例会造成荧光值变化是吧？那假如加的PI量对细胞量而言，都是过饱和的，保证所有的DNA都完全结合PI，在排除仪器CV值的情况下，荧光强度就基本会一致了是吧？

tianhuahuang

niwanmao 发表于 2015-1-23 09:55
过量，首先就是一个不标准的、不正确的操作，你如果看过站内关于抗体滴定的文章，就知道过量并不是好事。 ...

明白了，谢谢倪老师！