Fibrocyte 染色求助

v2002lichao

请问一下大家有谁做过循环纤维细胞的？胞内染色I型胶原是否需要刺激？刺激多长时间？还有就是检测I型胶原的荧光抗体没有直接的，都是抗I型胶原--Biotin 然后再用链霉素--荧光抗体，请问一下老师，这样做孵育时间上怎么控制呢？

niwanmao

间接标记一般说来每一步也都是15分钟左右，但具体哪个时间最好，当然还是需要自己做孵育时间梯度是最好的：）

v2002lichao

niwanmao 发表于 2015-1-25 21:03
间接标记一般说来每一步也都是15分钟左右，但具体哪个时间最好，当然还是需要自己做孵育时间梯度是最好的： ...

感谢老师的回答，我还想问问是否需要刺激细胞呢？

niwanmao

v2002lichao 发表于 2015-1-25 21:57
感谢老师的回答，我还想问问是否需要刺激细胞呢？

直标的I型胶原 Merk有，FITC：产品链接

至于是否需要刺激，从我的理解来看，应该是不需要：http://www.jimmunol.org/content/166/12/7556.full

v2002lichao

niwanmao 发表于 2015-1-26 10:36
直标的I型胶原 Merk有，FITC：http://www.emdmillipore.com/CN/zh/product/Milli-Mark%C2%AE-Anti-Collag ...

再次感谢老师的回答！这个直标的抗体荧光是FITC 我觉得用PE能更好点，胞内的选个更亮一点的，而且看了很多文献，都是间接标记的，请问老师直接的和间接的有很大差别吗？如果没有的话我就间接法了。至于您推荐的文献我看过，我也认为不需要刺激了。再问个别的问题，老师，我们实验室用的BD的Treg/Th17表型的试剂盒。里面没有CD25 我想加上，试剂盒里的荧光是CD4Percp-cy5.5和Foxp3-APC,IL-17A-PE.CD25我加哪个荧光比较好？使用CantoII流式上机，谢谢！

niwanmao

v2002lichao 发表于 2015-1-26 23:33
再次感谢老师的回答！这个直标的抗体荧光是FITC 我觉得用PE能更好点，胞内的选个更亮一点的，而且看了很 ...

1、PE荧光是稍亮点，但FITC也不差，间接标记影响因素更多，更难做。我个人觉得有直标尽量选直标。
2、CD25可以选择紫光通道的BV421或者APC-cy7或者PE-cy7

v2002lichao

niwanmao 发表于 2015-1-27 08:46
1、PE荧光是稍亮点，但FITC也不差，间接标记影响因素更多，更难做。我个人觉得有直标尽量选直标。
2、CD2 ...

谢谢老师的回答 获益匪浅！

五月玫瑰

咱们俩研究的细胞一样啊，不过我的是大鼠的

v2002lichao

五月玫瑰 发表于 2015-1-30 15:26
咱们俩研究的细胞一样啊，不过我的是大鼠的

都是纤维化呗

v2002lichao

niwanmao 发表于 2015-1-27 08:46
1、PE荧光是稍亮点，但FITC也不差，间接标记影响因素更多，更难做。我个人觉得有直标尽量选直标。
2、CD2 ...

倪老师，我看了您推荐的直标的抗体，好像是抗人的，我做的是小鼠，这个是不是不行？