人早孕蜕膜Tregs流式检测

yurain2002

最近在做人早孕蜕膜T细胞流式检测，发现CD25+细胞比例很低（文献报道一般占CD4+细胞5%-10%），不知其中可能的原因是什么。标本在第1天下午6点左右孵表面抗体，用2%多聚甲醛冰箱冷藏，于第2天下午3点检测。
如果有做过类似标本的同行，请多多给予宝贵意见，谢谢！

niwanmao

可能是自发荧光导致表达异常。
建议用多聚甲醛固定2小时后离心去掉，再加PBS过夜。

kobe327292007

niwanmao 发表于 2015-1-27 18:57
可能是自发荧光导致表达异常。
建议用多聚甲醛固定2小时后离心去掉，再加PBS过夜。 ...

多聚甲醛固定与70％乙醇固定有何区别？

niwanmao

kobe327292007 发表于 2015-1-28 04:36
多聚甲醛固定与70％乙醇固定有何区别？

看样子kobe兄好久没来论坛了，呵呵。
参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4134-1-1.html

kobe327292007

niwanmao 发表于 2015-1-28 08:37
看样子kobe兄好久没来论坛了，呵呵。
参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4134-1-1.html ...

是的倪老师，我现在工作刚安稳下来，所以觉得是时候回来兑现诺言了。

kobe327292007

甲醛固定时间太长了。要是有原始数据，上传看看。

yurain2002

niwanmao 发表于 2015-1-27 18:57
可能是自发荧光导致表达异常。
建议用多聚甲醛固定2小时后离心去掉，再加PBS过夜。 ...

谢谢倪老师！太及时了。今天刚刚做完一批，照你的方法试试。

yurain2002

kobe327292007 发表于 2015-1-28 17:42
甲醛固定时间太长了。要是有原始数据，上传看看。

原始数据在流式细胞仪室的老师那里，暂时拷不到。

facetodog

可以固定2至4小时离心洗去，或者改用1%多聚甲醛固定24小时内检测最佳，最好还是及时上机

yurain2002

facetodog 发表于 2015-1-28 23:09
可以固定2至4小时离心洗去，或者改用1%多聚甲醛固定24小时内检测最佳，最好还是及时上机 ...

谢谢！其实能及时上机是最理想的。只是现实情况无法实现，无奈！